miR-196a/GATA6介导胶质瘤干细胞增殖及间质表型转化机制研究

发布时间：2022-11-01 21:59

　　目的:胶质瘤是成人中最常见的颅内原发性恶性肿瘤。虽然目前采用手术,放疗和放疗等综合治疗方法,但患者的预后仍然较差。根据世界卫生组织（WHO）的分类,胶质母细胞瘤（GBM,胶质母细胞瘤）是最恶性的胶质瘤,GBM预后不良的主要原因是其复发率高。尽管近年来联合使用替莫唑胺和标准放疗,但原发性GBM患者的平均生存期仅为14.6个月,5年生存率仅为9.8%。基于个体患者的GBM基因表型的变化可能是个体化治疗的突破。微小RNA（miRNA）是一类短的非编码RNA分子,参与一系列重要的生物过程,如细胞增殖,凋亡,代谢和分化。最近的研究证实,miRNA在不同人类肿瘤的产生,血管生成,侵袭和凋亡中起重要作用。相当多的研究表明恶性胶质瘤中某些特定miRNA的表达失调。在我们最近的研究中,我们发现miR-196a在高级别胶质母细胞瘤中的表达明显高于非肿瘤脑组织,但miR-196a在胶质瘤中的特定作用和机制尚不清楚。在本实验中,我们克隆了成熟microRNA-196a的序列,并对其在胶质瘤细胞中的生物学功能进行了初步研究。在该研究中,我们用慢病毒载体感染神经胶质瘤细胞系并建立稳定的细胞系,其过表达miR-19... 

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【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略词
第一部分 :miR-196a促进胶质瘤细胞的增殖和干细胞性并促进其向间质型转化的相关分子机制
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂和材料
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 慢病毒感染
            2.2.3细胞生物学功能实验
            2.2.4 细胞蛋白质提取
            2.2.5 Bradford蛋白质浓度的测定
            2.2.6 Western印迹凝胶电泳
            2.2.7 蛋白质转移膜
            2.2.8 抗体杂交
    3 结果
        3.1 建立稳定过表达和抑制表达miR-196a的细胞系
        3.2 过表达miR-196a促进胶质瘤细胞的增殖
        3.3 过表达miR-196a促进细胞周期进展
        3.4 miR-196a调节神经胶质瘤细胞周期相关蛋白的表达
        3.5 细胞侵袭和迁移实验
        3.6 miR-196a调节神经胶质瘤细胞EMT相关蛋白的表达
        3.7 干细胞成球实验
        3.8 miR-196aI转染后的胶质干瘤细胞的干细胞基因荧光鉴定
        3.9 miR-196aI转染后的胶质干瘤细胞中干细胞相关蛋白的表达
    4 讨论
第二部分 :miR-196a靶向调控GATA6 影响胶质瘤细胞生物学行为
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂和材料
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 细胞全基因组基因表达谱
            2.2.3 荧光素酶报告实验
            2.2.4 质粒转染
            2.2.5 建立人裸鼠胶质瘤移植模型
            2.2.6 细胞生物学功能实验
            2.2.7 细胞蛋白质提取
            2.2.8 Bradford蛋白质浓度的测定
            2.2.9 Western印迹凝胶电泳
            2.2.10 蛋白质转移膜
            2.2.11 抗体杂交
    3 结果
        3.1 通过生物信息学和芯片结果分析找到miR-196a的候选靶基因
        3.2 通过数据验证GATA6 在不同胶质瘤表达水平
        3.3 通过实验验证GATA6是miR-196a的靶基因
        3.4 挽救实验
            3.4.1 GATA6 过表达可部分逆转miR-196a诱导的细胞增殖
            3.4.2 GATA6 过表达可部分逆转miR-196a诱导的EMT
            3.4.3 GATA6 过表达可部分逆转胶质瘤细胞干性
        3.5 GATA6 过表达对裸鼠皮下肿瘤形成的影响
    4 讨论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]High miR-196a levels promote the oncogenic phenotype of colorectal cancer cells[J]. Carl Christoph Schimanski,Kirsten Frerichs,Fareed Rahman,Martin Berger,Hauke Lang,Peter R Galle,Markus Moehler,Ines Gockel.  World Journal of Gastroenterology. 2009(17)



本文编号：3700175