大鼠脑缺血再灌注后Cathepsin L与细胞自噬的相关性研究

发布时间：2017-05-16 17:11

  本文关键词：大鼠脑缺血再灌注后Cathepsin L与细胞自噬的相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的通过建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,观察大鼠脑缺血再灌注损伤后损伤区神经细胞内的自噬体、溶酶体的形态学变化,检测cathepsin L及自噬相关蛋白LC3 II表达的变化;观察cathepsin L特异性抑制剂Z-FY-DMK对脑缺血再灌注损伤后神经细胞自噬的影响。方法将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、干预组,后三组再分为3h、6h、12h、24h这四个时间点。应用改良的Longa线栓法制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型(MCAO),正常组无特殊处理,假手术组插线深度为9±0.5mm。干预组在术前30分钟侧脑室穿刺注射Z-FY-DMK(1nmol,5ul DMSO),假手术组及模型组在术前30分钟侧脑室注入等体积的DMSO溶液。采用Longa’s的5级标准评分法评价各组大鼠脑缺血再灌注后各时间点的神经功能缺损。采用TTC染色观察各组大鼠脑缺血再灌注后24h的脑组织梗死灶。采用Western bolt检测cathepsin L及自噬相关蛋白LC3II在各组各时间点表达的变化。采用电镜观察自噬体、溶酶体的形态学变化。结果1.大鼠脑缺血再灌注损伤模型建立成功率88.89%。2.TTC染色正常组、假手术组未见脑组织梗死灶;模型组和干预组缺血侧皮质可见苍白色梗死灶,干预组梗死面积较模型组减小,且干预组大鼠神经功能评分较模型组改善。3.电镜观察正常组及假手术组神经细胞核膜完整、染色质结构正常,可以观察到溶酶体的存在,数量较少,未见自噬体。模型组3小时可见溶酶体数量增多、体积增大,可观察到出现自噬体;6~12h自噬体、溶酶体数量显著增多,可观察到自噬体包裹的细胞器残体,可观察到呈泡状的自噬溶酶体;24小时仍可见自噬体、溶酶体,但数量较前均有所减少。干预组各时间点镜下所见与模型组相似,但自噬体、自噬溶酶体等结构数量较之减少。4.Western bolt检测cathepsin L:正常组、假手术组各时间点cathepsin L的表达相同;模型组cathepsin L的表达在大鼠脑缺血再灌注3h、6h、12h呈上升趋势,12h达到高峰,24h下降,各时间点表达量均高于假手术组。干预Cathepsin L在各时间点的表达趋势与模型组相同,各时间点的表达量均高于假手术组,低于模型组。5.Western bolt检测LC3II蛋白:正常组、假手术组各时间点LC3II蛋白的表达相同;模型组LC3II蛋白的表达在大鼠脑缺血再灌注3h、6h、12h呈上升趋势,12h达到高峰,24h下降,各时间点表达量均高于假手术组。干预组LC3II蛋白在各时间点的表达趋势与模型组相同,各时间点的表达量均高于假手术组,低于模型组。结论(1)在大鼠脑缺血再灌注损伤后,细胞自噬的活性增强。(2)在大鼠脑缺血再灌注损伤中,Cathepsin L参与了细胞自噬的介导。
【关键词】：脑缺血再灌注损伤 溶酶体 细胞自噬 Cathepsin L LC3 II
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 摘要6-9
• Abstract9-14
• 第1章 绪论14-16
• 第2章 材料和方法16-26
• 2.1 材料16-20
• 2.1.1 主要仪器及设备16-17
• 2.1.2 主要实验试剂及药品17
• 2.1.3 常用溶液的配置17-20
• 2.2 实验动物20
• 2.3 方法20-24
• 2.3.1 实验动物分组20
• 2.3.2 建立大鼠大脑中动脉（MCA）缺血再灌注模型20-22
• 2.3.3 大鼠侧脑室注射给药22
• 2.3.4 处理标本22-24
• 2.4 统计学分析24-26
• 第3章 结果26-36
• 3.1 动物模型成功率26
• 3.2 神经功能评分26-27
• 3.3 TTC染色27-28
• 3.4 Western bolt检测28-33
• 3.4.1 Western bolt检测大鼠脑缺血再灌注后各时间点cathepsin L的表达及Z-FY-DMK对其的作用28-30
• 3.4.2 Western bolt检测大鼠脑缺血再灌注后各时间点LC3II蛋白的表达及Z-FY-DMK对其的作用30-33
• 3.5 电镜检测33-36
• 第4章 讨论36-44
• 4.1 大鼠脑缺血再灌注的模型制备36-37
• 4.1.1 实验动物的选择36
• 4.1.2 实验大鼠的选择36-37
• 4.2 脑缺血再灌注损伤概述37-38
• 4.3 脑缺血再灌注损伤与cathepsin L38-39
• 4.4 脑缺血再灌注损伤与细胞自噬39-41
• 4.4.1 细胞自噬概述39
• 4.4.2 细胞自噬的检测39-41
• 4.5 细胞自噬与cathepsin L41-44
• 第5章 结论44-46
• 参考文献46-50
• 附录50-52
• 综述52-60
• 参考文献57-60
• 作者攻读学位期间的科研成果60-62
• 致谢62

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本文编号：371433