人脑胶质母细胞瘤干细胞生物钟Per2基因的节律性研究

发布时间：2023-02-08 21:25

　　目的探究在人源性U87胶质瘤细胞系中是否有干细胞的存在,并对其生长状态和形态学的变化进行查看,进而探究生物钟基因Period2(Per2)的节律性。方法(1)细胞分离、提取与鉴定(1)应用悬浮培养的方式和添加bFGF、rhEGF、B27、N2到不含血清的培养基中来培养胶质瘤U87细胞,通过倒置相差显微镜查看分离、培养获得的肿瘤球形态及生长性状;应用免疫荧光染色对干细胞肿瘤球进行表面蛋白的鉴定;应用RT-qPCR检测干细胞肿瘤球表面蛋白的mRNA表达量。(2)用含血清的完全培养基(DMEM:胎牛血清:青链霉素=1:10%:1%)对干细胞肿瘤球进行分化诱导培养,并用免疫荧光细胞染色鉴定分化诱导细胞的表型,进而判定干细胞肿瘤球的多向分化能力。(2)生物钟基因Per2的节律性应用含10%血清的DMEM和添加营养因子的无血清的干细胞培养基分别培养U87细胞和U87干细胞肿瘤球,然后在培养基中加入PMA诱导剂,诱导其产生生物钟基因的表达,进而选取不同的时间点4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h的细胞,用实时荧光定量PCR检测Per2基因在两种细胞中的节律性。结果1.在有10%血清...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
符号说明
前言
材料与方法
    1.实验材料
        1.1 细胞株
        1.2 主要试剂与耗材
        1.3 主要实验仪器
        1.4 主要实验溶液配制
    2.实验方法
        2.1 U87细胞的复苏、培养及传代
        2.2 U87肿瘤球干细胞的分离提取及传代
        2.3 免疫荧光细胞染色法鉴定肿瘤球干细胞
        2.4 RT-qPCR法测定干细胞表面蛋白
        2.5 U87肿瘤球干细胞的成球能力实验
        2.6 肿瘤球干细胞的诱导培养及其免疫荧光细胞染色
        2.7 PMA处理U87细胞和U87肿瘤球干细胞
        2.8 RT-qPCR法检测生物钟基因Per2的表达
        2.9 统计数据分析与图像处理
结果
    1.U87胶质瘤细胞的形态变化
    2.U87肿瘤球干细胞分选及形成
    3.U87肿瘤球干细胞CD133、Nestin、Sox2的荧光染色
    4.干细胞标志物CD133、Nestin、Sox2的相对表达量
    5.U87肿瘤球干细胞二次成球情况
    6.诱导分化细胞的形态变化
    7.分化细胞的免疫荧光
    8.Per2基因在U87细胞中不同时间点的相对表达
    9.Per2基因在肿瘤球干细胞中不同时间点的相对表达
讨论
结论
参考文献
文献综述
    综述参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
个人简介
开题、中期及学位论文答辩委员组成



本文编号：3738400