高膳食纤维饮食对小胶质细胞的调节作用影响脑缺血后神经再生机制研究

发布时间：2023-03-09 20:16

　　目的:卒中是全球人类残疾和死亡的主要的原因,缺血性梗死是其最常见的亚型之一。溶栓和机械取栓虽然有效,但仅限于急性期治疗。与之相比,缺血后脑组织的修复及其可塑性能够为多种治疗方法提供长达数月的治疗时间窗。缺血性梗死后脑组织的修复及其可塑性包括神经元发生,轴突再生,少突胶质细胞,前体细胞发生及少突胶质细胞髓鞘化等,这与其运动功能恢复密切相关。寻求一种有效的能够增强缺血性梗死后脑组织修复及其可塑性,进一步促进缺血性梗死后功能恢复的治疗方法对缺血性梗死患者运动功能的恢复至关重要。肠道微生物影响神经生理和行为学,肠道细菌也可通过调节宿主代谢产物,影响中枢神经系统(central nervous system,CNS)功能。代谢产物可以通过血脑屏障(blood brain barrier,BBB)进入中枢神经系统直接影响神经活动。肠道营养支持已被应用在脑梗死患者中,长期的肠道营养可以塑造肠道微生物群落,也可以影响宿主的免疫肠道营养,这些作用可能对脑梗死的预后产生积极的影响。高膳食纤维饮食(High fiber diet,HFD),是近年来最被广泛应用的肠道营养干预之一,在高血压,糖尿病,炎症性肠病...

【文章页数】：111 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:各干预组对脑缺血后肠道菌群与肠道内容物SCFAs含量影响
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 实验对象
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 颅内注射ET-1制作局部脑缺血模型
            2.2.2 HFD干预
            2.2.3 VSL#3干预
            2.2.4 粪菌移植
            2.2.5 SCFAs干预
            2.2.6 靶向短链脂肪酸代谢定量分析
            2.2.7 微生物组 16srRNA
            2.2.8 生物信息分析
        2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 缺血后不同时间点大鼠肠道菌群丰度及多样性变化
        3.2 各干预组对脑梗死大鼠肠道菌群丰度及多样性影响
        3.3 各干预组对大鼠肠道菌群门分类水平的影响
        3.4 各干预组对大鼠肠道菌群重要菌群属水平的影响
        3.5 各干预组对大鼠肠道菌群整体结构的影响
        3.6 各干预组对大鼠肠道内容物 SCFAs 含量的影响
        3.7 肠道菌群与肠道内容物 SCFAs 含量联合分析
    4 讨论
    5 结论
第二部分:HFD促进神经功能恢复归功于SCFAs的增加促进神经发生
    6 前言
    7 材料和方法
        7.1 材料
            7.1.1 实验对象
            7.1.2 实验材料
            7.1.3 主要仪器
        7.2 实验方法
            7.2.1 大鼠梯形平衡木行走实验
            7.2.2 圆筒实验
            7.2.3 粘贴实验
            7.2.4 免疫荧光
            7.2.5 免疫组化
            7.2.6 流式细胞术
            7.2.7 Western Blot
            7.2.8 RT-qPCR实验步骤详见第三部分
            7.2.9 图像处理及数据分析
        7.3 统计学分析方法同第一部分
    8 结果
        8.1 SCFAS和益生菌能够部分恢复缺血后大鼠的运动功能
        8.2 SCFAS和益生菌促进神经功能恢复归功于SCFAS的增加
        8.3 SCFAs不影响缺血后大鼠梗死区域神经元凋亡
        8.4 SCFAS能够促进缺血后大鼠的SVZ神经发生
        8.5 SCFAS能够调节小胶质细胞炎症反应及表型
    9 讨论
    10 结论
第三部分:SCFAs对于小胶质细胞功能及表型的影响及所涉及的通路
    11 前言
    12 材料和方法
        12.1 材料
            12.1.1 细胞系
            12.1.2 实验动物
            12.1.3 主要材料
            12.1.4 主要仪器
        12.2 方法
            12.2.1 BV2细胞培养及处理
            12.2.2 ERK1/2和JNK信号通路抑制剂处理细胞实验
            12.2.3 原代提取神经干细胞
            12.2.4 神经干细胞条件性培养
            12.2.5 细胞RNA提取实验
            12.2.6 动物RNA提取实验
            12.2.7 PCR array实验
            12.2.8 RNA逆转录及实时定量PCR实验
            12.2.9 ELISA实验
            12.2.10 Western Blot实验详见第二部分
            12.2.11 流式细胞术实验详见第二部分
        12.3 统计学分析方法同第一部分
    13 结果
        13.1 SCFAs 对于小胶质细胞免疫炎症调节作用关键基因初筛结果
        13.2 SCFAs 对于 SVZ 区神经发生调节作用关键基因初筛结果
        13.3 SCFAs 对于小胶质细胞免疫炎症调节作用的体外实验验证
        13.4 体外实验 SCFAs 对小鼠小胶质细胞炎症反应和表型的影响
        13.5 MAPK信号通路在SCFAs促进小胶质细胞炎症反应的研究
        13.6 小胶质细胞培养上清促进神经再生与分化作用的研究
    14 讨论
    15 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3758226