腺苷A2A受体在实验性自身免疫性重症肌无力中的机制研究

发布时间：2023-03-19 08:25

　　目的：1、揭示A2AR在实验性自身免疫性重症肌无力（ExperimentalAutoimmune Myasthenia Gravis，EAMG）发生、发展中的作用；2、证实A2AR是通过作用于EAMG病理性T细胞进而影响EAMG的发病过程；3、探讨激活A2AR调节EAMG疾病进程的具体分子机制。 方法：1、通过主动免疫建立大鼠EAMG动物模型；2、组织病理学实验技术检测A2AR的表达和相关病理学改变；3、FACS方法检测A2AR在CD4+T细胞、CD8+T细胞和B细胞上的分布；4、体外加入A2AR激动剂CGS21680、A2AR拮抗剂SCH58261、ZM241385，cAMP拮抗剂H-89后ELISA方法检测细胞培养上清中anti-AChR IgG的分泌情况、3H标记技术检测淋巴细胞增殖能力、FACS方法检测Th1、Th2、Th17及Treg四种亚型的改变；5、免疫磁珠法分选细胞获得B细胞加入CGS21680后ELISA方法检测细胞培养上清中anti-AChR IgG的分泌情况、3H标记技术检测B淋巴细胞增殖能力；6、于一次免疫前一天和二次免疫前一天分别给予CGS21680，观察老鼠...

【文章页数】：88 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中英文对照
中文摘要
Abstract
1、文献综述
    1.1 重症肌无力简介
        1.1.1 重症肌无力
        1.1.2 实验性自身免疫性重症肌无力
        1.1.3 MG/EAMG 的免疫调节机制
    1.2 腺苷 A2A 受体简介
        1.2.1 腺苷
        1.2.2 腺苷受体
        1.2.3 腺苷 A2A 受体
        1.2.4 A2AR 治疗自身免疫性疾病
        1.2.5 A2AR 的功能
2、前言
3、材料与方法
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物及细胞
        3.1.2 仪器设备
        3.1.3 药品与试剂
    3.2 主要试剂配制方法
        3.2.1 缓冲液
        3.2.2 细胞培养液
        3.2.3 免疫病理实验用试剂
        3.2.4 免疫抗原
        3.2.5 流式所用试剂
        3.2.6 其它试剂
    3.3 实验方法
        3.3.1 EAMG 动物模型的建立及评定
        3.3.2 CGS21680 体内给药治疗
        3.3.3 处死动物，组织取材
        3.3.4 淋巴细胞培养
        3.3.5 检测 A2AR 在 EAMG 中的作用
        3.3.6 抗 AChR IgG 抗体的检测
        3.3.7 ELISA 方法检测血清及细胞培养上清中细胞因子分泌情况
        3.3.8 淋巴细胞增殖实验
        3.3.9 流式细胞术检测
        3.3.10 磁珠分选 B 淋巴细胞
        3.3.11 免疫荧光法检测神经肌肉接头处 AChR、C3 和 IgG 的变化情况
    3.4 数据处理和统计学检验
4、实验结果
    4.1 EAMG 模型的建立
        4.1.1 临床评分和体重
        4.1.2 EAMG 大鼠血清中的 anti-AChR IgG 检测
        4.1.3 EAMG 大鼠神经肌肉接头处 AChR 缺失并且 IgG 和补体 C3 沉着
    4.2 检测 A2AR 在 EAMG 中的表达
        4.2.1 EAMG 淋巴结和脾中的 A2AR 的表达
        4.2.2 A2AR 在 CD4+T 细胞、CD8+T 细胞和 B 细胞上的表达
    4.3 激活 A2AR 观察 AChR 特异性淋巴细胞的变化
        4.3.1 激活 A2AR 后对 AChR 特异性淋巴细胞 anti-AChR IgG 分泌的影响
        4.3.2 激活 A2AR 后对 AChR 特异性淋巴细胞 anti-AChR IgG 分泌细胞的影响
        4.3.3 激活 A2AR 后对 AChR 特异性淋巴细胞增殖活性的影响
    4.4 体外激活 A2AR 后对 AChR 特异性 T 淋巴细胞和 B 淋巴细胞的影响
        4.4.1 激活 A2AR 后对 B 细胞增殖和抗体分泌的作用
        4.4.2 激活 A2AR 后能够改变 Th 亚群的分布
    4.5 体内激活 A2AR 后对 EAMG 发病的影响
        4.5.1 预防性体内给药实验完全缓解 EAMG 的发病而治疗性给药部分缓解 EAMG 的发病过程
        4.5.2 治疗性给药和预防性给药对于血清中 anti-AChR IgG 的影响和AChR 特异性淋巴细胞增殖能力的影响
        4.5.3 预防性给药方案组能够逆转 Th 细胞亚群失衡
5、讨论
6、结论
致谢
参考文献
个人简历



本文编号：3764919