丙酮酸乙酯通过Nrf2途径抑制谷氨酸对大鼠小脑颗粒神经元的毒性作用

发布时间：2023-06-13 21:36

　　目的:探讨丙酮酸乙酯是否对谷氨酸诱导的新生大鼠小脑颗粒神经元具有保护作用及其作用机制。方法:体外原代培养新生7 d大鼠小脑颗粒神经元模型。将培养皿中成熟细胞模型随机分为空白对照组、谷氨酸组和谷氨酸+丙酮酸乙酯组。通过MTT法及FDA/PI荧光双染色法测定细胞存活率,用显微镜观察细胞形态并用核染色法分析核形态学变化;通过Fluo-3/AM检测细胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i);通过H₂-DCF-DA染色检测细胞内ROS含量;通过DHE染色法检测细胞内超氧阴离子含量;通过免疫组化和Western blot法检测细胞核和细胞浆中核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)的表达水平;通过抗氧化反应元件(ARE)诱导转录并采用双萤光素酶报告基因实验检测转录活性。结果:(1)丙酮酸乙酯可剂量依赖性(0.1～5 mmol/L)拮抗谷氨酸的兴奋性毒性作用(P<0.05);(2)丙酮酸乙酯(2.5和5 mmol/L)+谷氨酸30 min可阻滞[Ca²⁺]_i升高(P<...

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【文章目录】：
材料和方法
    1 主要试剂
    2 小脑颗粒神经元培养
    3 Glu兴奋性模型建立与实验分组
    4 主要方法
        4.1 FDA/PI荧光染色
        4.2 MTT实验
        4.3 细胞内游离钙浓度（intracellular free calcium concentration,[Ca2+]i）的测定
        4.4 H2-DCF-DA检测
        4.5 DHE检测超氧阴离子
        4.6 Western blot
        4.7 免疫组化
        4.8 ARE诱导转录活性检测
    5 统计学处理
结果
    1 EP对小脑颗粒神经元的保护作用
    2细胞内ROS检测结果
    3小脑颗粒神经元[Ca2+]i检测结果
    4 EP通过激活Nrf2/ARE/HO-1通路发挥神经保护作用
讨论
    1 Glu对体外培养小脑颗粒神经元的毒性作用
    2 EP对小脑颗粒神经元的保护作用
    3细胞内ROS检测结果
    4 EP抑制细胞内钙升高
    5 EP通过激活Nrf2/ARE通路而发挥神经保护作用



本文编号：3833341