母爱剥夺对缺氧缺血性脑损伤新生鼠远期行为发育的影响及海马神经再生研究
本文关键词：母爱剥夺对缺氧缺血性脑损伤新生鼠远期行为发育的影响及海马神经再生研究，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的研究母爱剥夺(maternal deprivation,MD)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxicischemic brain damage,HIBD)新生大鼠远期行为发育的影响,及其下丘脑-垂体-肾上腺轴(hypothalamic pituitary adrenocortical axis,HPA轴)激素水平、海马病理学、神经元数目、与神经再生相关的蛋白及其核酸表达的变化,探讨早期MD对HIBD大鼠的影响及可能机制,旨在为新生儿重症监护病房中HIBD患儿尽可能创造母子互动机会,以及早期干预提供基础理论依据。方法采用Rice法建立7日龄(postnatal day 7,P7)SD新生大鼠HIBD模型,即分离并结扎离断右侧颈总动脉,再放入缺氧装置中给予80 mL/L氧氮混合气体,吸入2.5 h。造模成功后,随机分为四组:雌性对照(control female,CF)组、雄性对照(control male,CM)组、雌性母爱剥夺(maternal deprivation female,MF)组、雄性母爱剥夺(maternal deprivation male,MM)组。另设雌性假手术(Sham female,SF)组、雄性假手术(Sham male,SM)组,其仅分离右侧颈总动脉。MD组大鼠于造模后第2 d至第14 d每天接受3 h的母子分离,出生第28 d后应用Morris水迷宫实验测试大鼠学习记忆能力,高架十字迷宫实验测试大鼠焦虑情绪,HE染色观察大鼠右侧脑海马病理形态学改变,尼氏染色计数大鼠右侧脑海马存活神经元数目,免疫组织化学法检测大鼠右侧脑海马巢蛋白(nestin)和水通道蛋白-4(AQP-4)的阳性细胞数,RT-PCR法检测大鼠右侧脑海马nestin和AQP-4 mRNA的表达变化,western-blot检测大鼠右侧脑海马nestin蛋白表达变化,酶联免疫吸附(Enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)实验测定大鼠血清中促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、皮质酮(Corticoserone,CORT)水平。结果1.morris水迷宫实验结果显示,mf组和mm组大鼠在潜伏期和穿台次数中成绩明显差于cf组和cm组(p0.05),cf组和cm组成绩明显差于sf组和sm组(p0.05);mf组与mm组比较,差异不明显(p㧐0.05)。2.高架十字迷宫实验结果显示,mf组和mm组大鼠成绩明显差于cf组和cm组(p0.05),cf组和cm组成绩差于sf组和sm组(p0.05);cf组好于cm组(p0.05),mf组好于mm组(p0.05)。3.elisa实验结果显示,cf组和cm组大鼠血清中acth、cort、crh的含量明显高于sf组和sm组(p0.05),mf组和mm组明显高于cf组和cm组(p0.05);cf组高于cm组(p0.05),mf组高于mm组(p0.05)。4.he染色结果显示,sf组和sm组右侧大脑海马区细胞层数多,排列整齐,细胞轮廓正常,核仁清晰;cf组和cm组右侧大脑海马区细胞层数减少,排列较为疏松,细胞轮廓及形态较为正常;mf组和mm组右侧海马区细胞排列疏松、紊乱,核仁偏移及碎裂。5.神经元尼氏染色计数显示,mf组和mm组右侧大脑海马区神经元存活数目明显少于cf组和cm组(p0.05),cf组和cm组少于sf组和sm组(p0.05);mf组与mm组比较,差异不明显(p㧐0.05)。6.免疫组织化学染色结果显示,cf组和cm组nestin阳性细胞数目明显多于sf组和sm组(p0.05),mf组和mm组明显少于cf组和cm组(p0.05),mf组多于mm组(p0.05);cf组和cm组aqp-4阳性细胞数目多于sf组和sm组(p0.05),mf组和mm组明显多于cf组和cm组(p0.05),mf组与mm组比较,差异显著(p0.05)。7.rt-pcr检测结果显示,mf组和mm组nestinmrna的表达量低于cf组和cm组(p0.05),cf组和cm组高于sf组和sm组(p0.05),mf组高于mm组(p0.05);mf组和mm组aqp-4mrna的表达量明显高于cf组和cm组(p0.05),cf组和cm组高于sf组和sm组(p0.05),mf组与mm组比较,差异显著(p0.05)。8.Western-blot结果显示,MF组和MM组nestin蛋白的表达量明显低于CF组和CM组(P0.05);MF组与MM组比较,差异显著(P0.05)。结论1.MF和MM组大鼠在水迷宫和高架十字迷宫测试中成绩明显差于CF和CM组,而CF和CM组成绩又差于SF和SM组,说明MD加重了HIBD大鼠的焦虑情绪及远期学习记忆能力的受损;高架十字迷宫测试中,雄性大鼠成绩明显差于雌性,表明雄性大鼠的焦虑症状较雌性大鼠更严重,推测早期应激事件例如MD,对雄性大鼠的影响更大。2.与CF和CM组相比,MF和MM组大鼠血清中CRH、ACTH、CORT水平升高,说明作为应激事件,MD导致了大鼠HPA轴功能的改变;其中雌性大鼠血清中激素水平普遍高于雄性,表明作为应激事件,例如MD甚至仅分离右侧颈总动脉,对雌性大鼠HPA轴的功能影响更大,或雌性大鼠HPA轴的功能变化对应激事件的反应更敏感;结合高架十字迷宫实验结果,推测可能雌性大鼠通过HPA轴功能改变调节焦虑情绪的能力强于雄性大鼠。3.与CF和CM组相比,MF和MM组大鼠海马区病理损害严重,神经元存活数目减少,与神经再生相关的蛋白nestin表达降低,AQP-4表达增多,表明MD后海马神经细胞的再生受抑制,不利于脑损伤修复,神经再生受抑制可能是MD加重HIBD大鼠学习记忆能力受损的机制之一。
【关键词】：缺氧缺血 母爱剥夺 巢蛋白 水通道蛋白 HPA轴
【学位授予单位】：成都医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R742
【目录】：
- 摘要6-9
- Abstract9-13
- 前言13-16
- 1 实验材料16-22
- 1.1 主要设备和仪器16-17
- 1.2 主要的药品和试剂17-19
- 1.3 主要试剂配制19-22
- 2 实验方法22-33
- 2.1 实验动物与分组22
- 2.2 模型制备22
- 2.3 MD干预22-23
- 2.4 行为学测试23-24
- 2.5 病理形态学观察24-27
- 2.6 酶联免疫吸附法检测血清中CRH、ACTH、CORT水平27-28
- 2.7 RT-PCR检测nestin mRNA、AQP-4 mRNA28-30
- 2.8 Western-blot检测nestin蛋白水平30-32
- 2.9 实验数据的处理及分析32-33
- 3 实验结果33-52
- 3.1 MD对HIBD大鼠学习记忆的影响33-35
- 3.2 MD对HIBD大鼠情绪记忆的影响35-36
- 3.3 MD对HIBD大鼠HPA轴激素水平的影响36-38
- 3.4 MD对HIBD大鼠病理形态学及神经元数目的影响38-44
- 3.5 MD对HIBD大鼠右侧海马nestin和AQP-4 表达的影响44-49
- 3.6 MD对HIBD大鼠右侧海马nestin和AQP-4 mRNA表达的影响49-51
- 3.7 MD对HIBD大鼠右侧海马nestin蛋白表达的影响51-52
- 4 讨论52-58
- 4.1 HIBD大鼠动物模型及MD模型的建立52-53
- 4.2 MD对HIBD大鼠行为学的影响53-54
- 4.3 MD对HIBD大鼠HPA轴功能及激素水平的影响54-55
- 4.4 MD对HIBD大鼠神经元数目及神经再生的影响55-58
- 5 结论58-59
- 参考文献59-64
- 文献综述 164-73
- 参考文献70-73
- 文献综述 273-81
- 参考文献78-81
- 附录81-82
- 攻读学位期间的研究成果82-83
- 致谢83-84
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，本文编号：386815
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