PEX基因对脑胶质瘤干细胞生物活性影响的实验研究

发布时间：2024-02-13 18:10

　　目的 从C6胶质瘤细胞系中分离培养胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)，并进行纯化鉴定从而获得可靠的GSCs细胞株；研究重组子pDsRed2-C1-PEX对GSCs生物学活性及微环境的影响。 方法 （1）采用全贴壁培养法培养C6胶质瘤细胞，无血清悬浮分离及单克隆培养纯化扩增GSCs，细胞免疫荧光化学染色鉴定GSCs。 （2）脂质体介导pDsRed2-C1-PEX转染大鼠C6胶质瘤干细胞及荧光显微镜下观察转染荧光，RT-PCR鉴定PEX在GSCs的表达及检测PEX对血管生成相关因子（MMP-2mRNA、VEGFmRNA）表达的影响。 （3） MTT法测定GSCs生长曲线，流式细胞仪检测细胞周期。 结果 （1）成功分离并培养出GSCs，单克隆培养GSCs呈球状生长，不易吹散，折光性较强，细胞免疫荧光染色鉴定出肿瘤球表达CD133，其分化的子代细胞表达NSE或GFAP，分化细胞为与神经元或胶质细胞相似的肿瘤细胞。 （2）成功瞬时转染，PEX在GSCs中高表达并且其对体外培养的GSCs的增殖有明显抑制作用，流式细胞仪检测细胞周期显示：GSCs-PEX转染组细胞周期G0/...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1第3代C6胶质瘤干细胞肿瘤球

结构较致密不易吹散，折光性较强。连续传3代后细胞，单克隆培养实验的肿瘤球形态规则呈球形，且为来源于同一细胞的大量亚细胞系克隆球，故非GSCs比例少（图1）。图1第3代C6胶质瘤干细胞肿瘤球图2GSCs呈CD133免疫荧光染色阳性（倒置相差显微镜,×400）（Cy3染色，倒....

图2GSCs呈CD133免疫荧光染色阳性（倒置相差显微镜,×400）（Cy3染色，倒置荧光显微镜×400）

色：冷PBS重悬细胞离心弃上清，每管细胞样品中加入0.535ML碘化色缓冲液0.5ml，碘化丙啶染色液(20X)25μl,RNaseA(50X)10μl缓慢胞沉淀，37℃避光温浴30分钟，用FCM方法检测三组细胞周期的变每组检查3孔细胞，即每组重复3次(n=3)。3结果....

图3GSCs分化的子代细胞呈NSE+

3.2GSCs免疫荧光鉴定BTS贴壁4h后，行CD133免疫荧光染色，结果显示胞膜胞浆发出红色BTS球体内有大量表达CD133的GSCs（图2）。贴壁分化10天后，分别行免疫荧光染色，结果显示BTSC子代分化细胞胞浆发出绿色荧光，表明G细胞表达NSE或GFAP，分化细胞为与神经....

图4GSCs分化的子代细胞呈GFAP+（FITC染色，倒置荧光显微镜×200）（FITC染色,倒置荧光显微镜×200）

3.2GSCs免疫荧光鉴定BTS贴壁4h后，行CD133免疫荧光染色，结果显示胞膜胞浆发出红色BTS球体内有大量表达CD133的GSCs（图2）。贴壁分化10天后，分别行免疫荧光染色，结果显示BTSC子代分化细胞胞浆发出绿色荧光，表明G细胞表达NSE或GFAP，分化细胞为与神经....

本文编号：3897039