鱼藤酮通过诱导过氧化氢抑制Akt/XIAP信号通路导致神经细胞凋亡的分子机理研究

发布时间：2024-02-14 01:32

　　本研究采用细胞培养、MTS分析、荧光染色成像、RNA干扰、Western blotting等细胞学分子生物学技术和方法,以PC12细胞和原代神经元为实验对象,综合研究了在鱼藤酮诱导神经细胞凋亡过程中,氧化应激H2O2对Akt信号通路的影响及其对关联的XIAP信号通路的调控机理；探讨了鱼藤酮诱导H202产生,抑制Akt经XIAP通路导致神经细胞凋亡机理。其结果如下：1鱼藤酮诱导H2O2依赖的神经细胞凋亡PC12细胞和原代神经元用0-1μM鱼藤酮处理24 h、或用过氧化氢酶(CAT, 350 U/ml)预处理1h后再用鱼藤酮(0.5和1μM)处理24h。用特异性荧光探针H2DCFDA显色成像分析细胞内H2O2变化,形态学和MTS分析细胞活性,Western blot分析Caspase-3和PARP蛋白表达评价细胞凋亡信号状况。结果表明,鱼藤酮以浓度依赖的方式明显诱导PC12细胞和原代神经元细胞H2O2升高和活性下降,以及Cleaved-caspase-3和Cleaved-PARP增加；用CAT预处理改善鱼藤酮诱导细胞形态改变和活性下降,且削弱鱼藤酮增加的Cleaved-caspase-3和...

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３－１?ＸＩＡＰ结构和功能示意图??

从而能进一步促进细胞存活ＰＳｌ。ＸＩＡＰ除了能发生自泛素化是自己降解外，还能??作用于其它与调亡相关的蛋白：ＸＩＡＰ可Ｗ是激活的Ｃａｓｐａｓｅ－３泛素降解，但并??不作用于其前体形式ｔＷ。其结构和功能如图３－１所示。??Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏ打?ｏｆ?Ｃａｓｐａｓｅ－３?ａｎｄ?－７....

图４－１鱼藤爾浓度依赖地诱导神经细胞活性降低??Ｆｉ，?４－１?Ｒｏｔｅｎｏｎｅ?ｄｏｓｅ－ｄｅｅｎｄｅｎｔｌｉｎｄｕｃｅｓ?ｖｉａｉｌｉｔｒｅｕｃｔｉｏｎ?ｉｎ?ｎｅｕｒｏｎａｌ?ｃｅｌｌｓ??

２实验结果??２．１鱼藤爾浓度依赖地诱导神经细胞死亡??由图４－１所示，用０－１?的鱼藤丽分别处理ＰＣ１２细胞和原代小鼠大脑皮质??神经元２４?ｈ后，细胞活性呈浓度依赖性下降，与对照组相比，用０．５?ｐｉＭ鱼藤厕??处理后，？（：１２细胞活力降至７９％，原代神经元活力降至６０％左....

图４－２鱼藤兩浓度依赖地诱导神经细胞Ｃａｓｐａｓｅ－３通路激活??Ｆｉ．?４－２?Ｒｏｔｅｎｏｎｅ?ｄｏｓｅ－ｄｅｅｎｄｅｎｔｌｉｎｄｕｃｅｓ?ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃａｓａｓｅ－３??

２．２鱼藤丽浓度依赖地激活神经细胞Ｃａｓｐａｓｅ－３通路??之前的研究发现，鱼藤丽可影响神经细胞活性，引起神经细胞死亡表现为??细胞活力下降。由图４－２可见，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分析显示鱼藤砸也浓度依赖地诱导??Ｐｒｏ－ｃａｓｐａｓｅ－３?和?Ｐｒｏ－ＰＡＲＰ?下降，同时?Ｃ....

图５－４过表达Ａｋｔ部分地阻止鱼藤麵诱导神经细胞化化产生??Ｆｉｇ．?５－４?Ｏｖｅｒｅｘｐｉ＇ｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?Ａｋｔ?ｂｌｏｃｋｓ?ｒｏｔ：ｅｎｏｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ?Ｈ２Ｏ２??

?？??表达Ａｋｔ。由图５－３Ａ可见，带有明显ＨＡ表达的Ａｄ－ｍｙｒ－Ａｋｔ细胞明显抵抗鱼藤??砸导致的Ａｋｔ、Ｆｏｘｏ３ａ和ＧＳＫ３（３磯酸化抑制；与之一致的，按照由ＭＴＳ细胞活??性分析、ＤＡＰＩ染色调亡分析和Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ分析结果可见，与对照组相比，鱼??藤丽诱导....

本文编号：3897530