miR-136影响胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭及迁移等生物学活性的研究

发布时间：2024-02-29 20:42

　　目的:miR-136在多种肿瘤发生发展中发挥类似抑癌基因的作用,参与肿瘤细胞的分化、生长、增殖、凋亡等一系列关键进程。本文通过研究miR-136的对下游靶基因的调控,从而探讨miR-136抑制胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及迁移等生物学活性的作用机制,展望miR-136、FZD4可作为临床治疗胶质瘤的潜在指标。方法:选取胶质瘤中的U251细胞系,采用含有10%胎牛血清和1%青霉素及链霉素的高糖DMEM培养基,置于恒温37℃,5%CO₂细胞培养箱中培养。待细胞贴壁后,胰酶消化计数,接种于6孔板中,分为2组,利用Lipofectamine2000转染试剂分别将miR-136 mimic(模拟物组)和miR-136模拟物阴性对照(对照组)转入U251细胞,采用实时定量PCR法检测转染效率,观察2组细胞中mi R-136的表达差异。显微镜下观察转染24 h后细胞的增殖情况,并拍照记录。CCK-8法检测转染后2组细胞增殖活性。Transwell和划痕实验分别检测转染后2组细胞的侵袭及迁移能力。根据检索miRnada生物信息学数据库,预测并分析mi R-136的下游靶基因。实时...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
中英文对照表
第一章 绪论
    1.1 神经胶质瘤
    1.2 MicroRNA
    1.3 靶基因Frizzled4(FZD4)
    1.4 研究的内容、方法、目的、意义及技术路线
第二章 人胶质瘤细胞的体外培养及转染
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 主要试剂和试剂盒
        2.1.3 主要实验设备及耗材
        2.1.4 主要试剂的配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 细胞转染及检测转染后miR-136的表达水平
    2.3 实验结果
    2.4 讨论
第三章 miR-136对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及迁移等学活性的影响
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞株
        3.1.2 主要试剂和试剂盒
        3.1.3 主要实验设备及器材
        3.1.4 主要试剂的配制
    3.2 试验方法
        3.2.1 胶质瘤U251细胞增殖能力检测
        3.2.2 Transwell实验法检测胶质瘤U251细胞侵袭能力
        3.2.3 划痕实验法检测胶质瘤U251细胞迁移能力
        3.2.4 统计学分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 胶质瘤U251细胞生长情况检测结果
        3.3.2 CCK-8实验法检测胶质瘤U251细胞增殖能力结果
        3.3.3 Transwell实验法检测胶质瘤U251细胞侵袭能力结果
        3.3.4 划痕实验法检测胶质瘤U251细胞迁移能力结果
    3.4 讨论
第四章 MiR-136对神经胶质瘤U251细胞作用的机制
    4.1 实验材料
        4.1.1 细胞株
        4.1.2 主要试剂和试剂盒
        4.1.3 主要实验设备和耗材
        4.1.4 主要试剂的配制
    4.2 试验方法
        4.2.1 miR-136下游靶基因
        4.2.2 检测转染后细胞中FZD4mRNA的表达水平
        4.2.3 蛋白印迹法检测转染后细胞中FZD4蛋白的表达水平
        4.2.4 统计学分析
    4.3 实验结果
        4.3.1 miR-136下游靶基因
        4.3.2 转染后U251细胞中FZD4mRNA的表达水平
        4.3.3 转染后U251细胞中FZD4蛋白的表达水平
    4.4 讨论
实验总结及展望
    1.实验总结
    2.展望
参考文献
综述
    参考文献
攻读硕士学位期间发表的论文及参加的课题
致谢



本文编号：3914897