MPTP诱导的帕金森病小鼠纹状体的全转录组研究

发布时间：2024-03-02 09:36

　　目的:MPTP急性造模的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠,其PD样症状会在急性期内出现,之后得到一定程度的缓慢恢复。此外PD病人常伴有视网膜的受累,但其分子机制并不明确。为研究其机制,本文通过全转录测序研究MPTP急性造模的PD小鼠纹状体内转录组动态变化,并比较正常小鼠纹状体和视网膜转录组差异。方法:取8周龄小鼠30只,随机分为三组,设为假手术组、PD急性期组(D3)及PD模型恢复期组(D28)。急性期组及恢复期组用MPTP急性模型造模,假手术组用生理盐水代替MPTP注射。采用爬杆和爬梁两种方法进行行为学测试。取纹状体、视网膜。高效液相色谱(HPLC)检测纹状体的多巴胺。提取纹状体及视网膜的总RNA,进行rRNA减除法和小RNA建库,利用Illumina平台的Hiseq X-10平台分别进行双端150bp和单端75bp读长测序。长链RNA数据利用RNA STAR软件映射到小鼠基因组序列(mm10版本),用FeatureCount和edgeR进行差异表达基因(DEG)分析。使用DAVID和CytoScape的ClueGO插件进行DEG富集的基因功能和KEGG通...

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-1小鼠造模及行为学测试示意图

鼠转移至饲养间，此时小鼠将满8周龄并进入成年期，待小鼠转移至饲养间随机开展验。检疫和饲养过程中，环境温度保持在25℃左右，相对湿度保持在50%左右，每天以光照12小时和黑暗12小时的周期交替以保证动物福利。实验人员将每天检查小鼠的食物和饮用水并及时补充，每隔三天更....

图2-2小鼠爬杆实验图

爬杆和爬梁两种方法进行行为学测试，，至造模当天所有小鼠应均可较为熟每天针对每组小鼠进行行为学测试，每保证小鼠体力得以恢复，计算平均值，。人[47]的行为学实验方法，搭建简易的顶爬至杆底所用时间反应小鼠的抓握50cm，直径1cm的金属杆垂直固定于顶部裹出一个2cm左右的小....

图2-3小鼠爬杆实验图

第二章实验材料与方法验装置如图，该方法通过测量小鼠通过光滑金属杆的时间反应小鼠四肢抓握能力。具体操作方法如下：将一根长25cm，直径2cm的光滑金属杆悬空水平固定于两个平平台离地约10cm，平台间距20cm，在金属杆下铺上垫料，防止小损伤；提起小鼠尾部，将其头朝前放置....

图2-4rRNA清除建库方法流程图

第二章实验材料与方法推荐的不同指数标记产生测序文库：首先，通过试剂盒除去核糖体应缓冲液在升高的温度下进行RNA体引物和RNA片段作为模板合成DNA聚合酶I和RNA酶H进行第纯化文库片段，用EB缓冲液洗脱接子。为了选择优选长度为200bp片段，用UN....

本文编号：3916675