AMPK-mTOR信号通路对自噬的影响在小鼠局灶性脑缺血损伤中的作用

发布时间：2017-05-26 07:05

  本文关键词：AMPK-mTOR信号通路对自噬的影响在小鼠局灶性脑缺血损伤中的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察小鼠永久性局灶性脑缺血损伤后大脑缺血半球皮层内单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated potein kinase,AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)表达的时向变化及对自噬相关蛋白LC3和Beclin-1表达的影响。探讨抑制AMPK活性在小鼠缺血性脑损伤的作用和机制。方法:选取健康成年雄性Balb/c小鼠,随机分为假手术组、溶媒对照组和药物干预组。溶媒对照组和药物干预组采用线栓法制作永久性大脑中动脉闭塞(permanent middle cerebral artery occlusion,p MCAO)模型,药物干预组于缺血时立即腹腔注射AMPK抑制剂Compound C(20mg/kg),溶媒对照组和假手术组于同时间注射等剂量溶媒(生理盐水+DMSO)。各组小鼠于术后3h、6h、12h和24h时间点取患侧皮层,采用Western blot法和免疫组化法检测AMPK、m TOR、p-AMPK、p-m TOR、LC3、Beclin-1的表达情况。以行为学症状、脑水肿、脑梗死体积和尼氏小体数量评价抑制AMPK活性对小鼠缺血性脑损伤的影响。结果:Western blot及免疫组化结果显示,假手术组小鼠大脑半球皮层内p-AMPK的表达水平较低,溶媒组小鼠p MCAO后,大脑缺血半球皮层内p-AMPK的表达在短期内迅速增加,3h为峰值,6h表达下降,但表达水平仍高,与假手术组相比有统计学意义(p0.01),12h和24h持续降低;p-AMPK与LC3、Beclin-1表达趋势一致,与p-m TOR表达趋势相反。用Compound C处理后,Compound C组较溶媒组小鼠大脑缺血半球皮层内p-AMPK表达水平明显降低,同时LC3、Beclin-1表达降低,p-m TOR表达升高(p0.05);小鼠脑缺血各时间点尼氏小体数量缺失减轻。脑缺血24h后,药物干预组较溶媒对照组神经功能评分改善,脑水肿减轻,脑梗死体积显著减小(p0.05)。结论:1、小鼠缺血性脑损伤后皮层组织自噬激活。2、小鼠缺血性脑损伤后皮层组织AMPK-m TOR信号通路激活,两种信号分子呈相互拮抗的时向关系。3、抑制AMPK活性能够抑制自噬。4、抑制AMPK活性对小鼠缺血性脑损伤具有保护作用,其机制可能与激活m TOR信号通路并抑制神经元自噬性死亡有关。
【关键词】：脑缺血 AMPK mTOR 自噬
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 中文摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 小鼠永久性局灶性脑缺血损伤后AMPK-mTOR-自噬的激活情况13-29
• 2.1 材料和方法13-21
• 2.1.1 实验材料13-16
• 2.1.2 实验方法16-20
• 2.1.3 统计学分析20-21
• 2.2 实验结果21-27
• 2.2.1 pMCAO小鼠大脑缺血半球皮层AMPK和mTOR水平的时向变化21-23
• 2.2.2 pMCAO小鼠大脑缺血半球皮层自噬标志蛋白LC3和Beclin-1 水平的变化23-25
• 2.2.3 免疫组化法显示pMCAO小鼠大脑缺血半球皮层AMPK-mTOR-自噬的激活情况25-27
• 2.3 小结27-29
• 第3章 探讨抑制AMPK活性在小鼠局灶性脑缺血损伤中的影响及作用机制29-36
• 3.1 材料和方法29-32
• 3.1.1 实验材料29
• 3.1.2 实验方法29-32
• 3.1.3 实验数据统计与分析32
• 3.2 实验结果32-35
• 3.2.1 抑制AMPK活性对pMCAO小鼠神经症状的影响32-33
• 3.2.2 抑制AMPK活性对pMCAO小鼠脑水肿的影响33
• 3.2.3 抑制AMPK活性对pMCAO小鼠脑梗死体积的影响33-34
• 3.2.4 抑制AMPK活性对pMCAO小鼠皮层尼氏小体数量的影响34-35
• 3.3 小结35-36
• 第4章 讨论36-42
• 4.1 脑缺血后AMPK和mTOR活性的时向改变和因果关系36-38
• 4.2 AMPK和mTOR在自噬中的相反调节：38-39
• 4.3 抑制AMPK在缺血性脑损伤中的作用及机制：39-40
• 4.4 总结40-42
• 第5章 结论与展望42-43
• 5.1 结论42
• 5.2 展望42-43
• 致谢43-44
• 参考文献44-47
• 攻读学位期间的研究成果47-48
• 综述48-55
• 参考文献53-55

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  本文关键词：AMPK-mTOR信号通路对自噬的影响在小鼠局灶性脑缺血损伤中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：396028