线粒体移植增强神经胶质瘤细胞辐射敏感性作用及机理研究

发布时间：2024-05-18 01:42

　　目的:研究线粒体移植对人神经胶质瘤细胞U87辐射敏感性的影响及其机理。方法:提取人星形胶质细胞(Human Astrocytes,HA)的线粒体与U87细胞共培养,并给予X射线辐照。然后通过Western Blot检测U87细胞中的线粒体凋亡通路关键蛋白质Cyto-C、Bax和Bcl-2的表达量;使用Annexin V/PI双染法检测U87细胞的凋亡情况;采用RT-CES系统对U87细胞的活力进行评价;通过细胞克隆实验比较各组细胞的增殖状况;采用鬼笔环肽染色法观察丝状伪足在细胞表面的分布量;通过Western Blot检测U87细胞中Fascin、MMP-2的表达量,通过划痕实验和体外侵袭实验检验U87细胞的体外转移能力。结果:第一,线粒体被提取出HA细胞后仍具有活力,Mito-Tracker Red标记的游离线粒体可以通过共培养的方式进入U87细胞,mtDNA全基因组测序进一步验证了线粒体移植结果;通过聚合酶链式反应(PCR)扩增ND1基因,并通过Western Blot检测Fis1和Drp1蛋白的结果表明游离线粒体能够在U87细胞内存活并大量复制mtDNA。第二,对进入细胞内荧光强...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1线粒体移植恢复损伤细胞功能原理

兰州大学硕士学位论文线粒体移植增强肿瘤细胞辐射敏感性作用及机理研究导致钙离子异常流入细胞内(图1B-c,d)[69]。高浓度的钙离子导致线粒体内膜的膜电位降低[70]、ATP产生减少并在线粒体膜上形成线粒体通透性转换孔(mitochondrialpermeability....

图2-1线粒体活性检测A.倒置相差显微镜下拍摄的HA细胞B.透射电镜下拍摄的游离线粒体C.200×荧光显微镜下

图2-1线粒体活性检测差显微镜下拍摄的HA细胞B.透射电镜下拍摄的游离线粒体C.200×荧光显微Mito-TrackerRed标记的游离线粒体D.400×荧光显微镜下拍摄的用Mito-TraRed标记的游离线粒体.2线粒体移植追踪观察结果明游离线粒体能够....

图2-3线粒体基因表型

以上结果表明线粒体移植组既表现出了供体HA细胞的线粒体基因表型，又表现出了受体U87细胞的线粒体基因表型，结合之前数据，充分证明了来源于HA细胞的游离线粒体通过共培养的方式成功进入U87细胞。图2-3线粒体基因表型(A)(B)

图2-3游离线粒体进入U87细胞后DN1基因的扩增和Fis1、Drp1蛋白的表达(A)通过PCR实验验证线粒体mtDNA拷贝关键蛋白ND1的扩增程程度

以上结果表明线粒体移植组既表现出了供体HA细胞的线粒体基因表型，又表现出了受体U87细胞的线粒体基因表型，结合之前数据，充分证明了来源于HA细胞的游离线粒体通过共培养的方式成功进入U87细胞。图2-3线粒体基因表型(A)(B)

本文编号：3976268