胶质瘤顺铂化疗后DNA损伤检控点ATM基因的表达变化及ATM基因慢病毒RNAi载体构建

发布时间：2025-01-09 05:25

　　第一部分：化疗前后不同时期胶质瘤组织中ATM的表达变化和意义 目的：探索化疗前后不同时期胶质瘤组织中ATM表达及变化规律，为确定分子靶向干预的最佳时机提供依据。 方法：利用人胶质瘤U251细胞裸鼠皮下异位移植制作胶质瘤模型，通过顺铂对荷瘤裸鼠进行化疗(5mg／kg／d连续腹腔注射4—5天)，建立胶质瘤化疗和化疗后进展模型。利用功能分类基因芯片系统检测化疗前后不同时期胶质瘤组织中ATM的表达情况,并利用实时定量RT-PCR和免疫组织化学进行验证。 结果：结果发现ATM在化疗前后不同时期表达出现明显变化，其中在化疗结束时表达显著增强，在化疗后肿瘤消退至最小时ATM表达又明显降低，然而在胶质瘤进展时其表达再次明显增强，定量RT-PCR和免疫组化结果与此相一致。 结论：化疗前后不同时期胶质瘤组织中ATM的表达呈动态变化，化疗结束时和肿瘤进展期表达明显上调。 第二部分：ATM基因慢病毒RNAi载体的构建 目的：构建ATM基因RNAi慢病毒载体，并检测其体外抑制U251和U87胶质瘤细胞中ATM的表达效率，为后续进一步研究奠定基础。 方法：设计筛选ATM基因RNAi有效靶...

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图2.基因芯片检测ATM在化疗不同时期表达变化

TM相对表达明显比化疗前表达上调(27.96±14.78VS=0.00)，肿瘤静止时比化疗结束时表达下调（4.40±3.41，P展时表达再次上调（30.15±7.02,P=0.00）。但是，化疗结ATM相对表达无显著差异(27.96±14.78VS30.15±7.....

图3.2.RT-PCR检测化疗不同时期ATM表达

）；P=0.00(化疗结束组VS肿瘤静止组）；P=0.00(化疗结束组VS肿止组VS肿瘤进展组）图3.1.实时荧光定量RT-PCR检测ATM扩增曲线

图3.1.实时荧光定量RT-PCR检测ATM扩增曲线

定量RT-PCR检测结果和基因芯片结果相一致，化疗不同s）分别为：1.00±0.00（对照组），4.98±0.58（化疗肿瘤静止组），8.04±0.34(肿瘤进展组)。各组间两两比3、图3.1-图3.3）表3.RT-PCR检测化疗不同时期ATM相对表达（x....

图4.化疗不同时期ATM表达免疫组织化学检测（原始放大倍数400×，A对照组，B化疗结束组，C肿瘤静止组，D肿瘤进展组）

图3.3.GAPDH和ATM扩增产物熔解曲线溶解度曲线2.4.化疗不同时期ATM表达免疫组织化学检测结果和基因芯片、RT-PCR检测结果相一致，在化疗结束时明显比对照组表达增强，肿瘤静止时表达减弱，在肿瘤进展时表达再次上调。（见图4）

本文编号：4025220