替莫唑胺对人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞Livin、ABCG2的影响

发布时间：2017-06-03 19:23

  本文关键词：替莫唑胺对人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞Livin、ABCG2的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：本研究旨在检测抗凋亡基因Livin在人脑胶质瘤TJ905细胞中的表达；观察化疗药物替莫唑胺作用于人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞时的体外抗瘤效应；以胶质瘤细胞及其干细胞为模型来研究肿瘤的耐药程度,迄今为止,鲜见关于胶质瘤细胞及其干细胞Livin基因抗凋亡诱导与化疗耐药的关系及其机制方面的系统研究报告。目的：分析化疗药物替莫唑胺干预入脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞模型,检测药物对细胞生存率、细胞周期变化和Livin mRNA、耐药基因ABCG2 mRNA表达量的影响,进而从胶质瘤细胞及干细胞理论角度揭示肿瘤耐药的根源,丰富和发展肿瘤细胞及其干细胞理论基础,为胶质瘤的治疗提供新的思路和方法。为攻克胶质瘤的化疗耐药难关奠定坚实的理论和实验基础。方法：培养人脑胶质瘤TJ905细胞,采用免疫磁珠法从培养的人脑胶质瘤TJ905细胞系中分选CD133+胶质瘤干细胞,对得到的干细胞进行培养及CD133+鉴定。构建人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞模型,采用不同药物浓度(0 μmol/l、50μmol/l、 100 μmol/l、200 μmol/l、400 μmol/l)的替莫唑胺在不同时间点(24 h、48 h、72h)干预人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞模型,对干预前后的人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞模型,采用细胞划痕技术检测细胞迁移能力变化、CCK-8法检测细胞增殖趋势变化、流式细胞仪检测细胞周期变化、RT-PCR技术Livin、ABCG2 mRNA表达量表达规律。结果：1.相同干预时间,不同浓度的替莫唑胺干预人脑胶质瘤TJ905细胞,迁移速度随药物浓度增加而降低(P0.05)；人脑胶质瘤TJ905细胞在相同浓度的替莫唑胺干预下,迁移速度随药物干预时间的延长而降低(P0.05)。2.随替莫唑胺浓度的升高和干预时间的延长,人脑胶质瘤TJ905细胞的密度降低,细胞出现皱缩,增殖受到明显抑制,并见散在的细胞碎片；人脑胶质瘤TJ905干细胞出现裂解、萎缩。3.在相同药物浓度干预时间的条件下,随着培养液中替莫唑胺浓度的增加,TJ905细胞及其干细胞的存活率逐渐降低(P0.05)；在相同药物浓度的条件下,人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞存活率随替莫唑胺干预时间的延长而降低(P0.05)。人脑胶质瘤TJ905细胞的存活率均低于TJ905干细胞。4.替莫唑胺干预人脑胶质瘤TJ905细胞,使细胞周期停滞在G0-G1期、G2-M期；相同干预时间条件下,随着替莫唑胺浓度增加细胞周期在G0-G1期、G2-M期所占比例越多(P0.05)；相同药物浓度条件下,随着干预时间的延长细胞周期在G0-G1期、G2-M期占比例越多(P0.05)；G0-G1期所占比例均高于G2-M期。5.替莫唑胺干预人脑胶质瘤TJ905干细胞,使细胞周期停滞在G2-M期、S期,相同干预时间条件下,随着替莫唑胺浓度增加细胞周期在G2-M期、S期所占比例越多(P0.05)；相同药物浓度条件下,随着干预时间的延长细胞周期在G2-M期、S期期所占比例越多(P0.05)；S期所占比例均明显高于G2-M期。6.相同干预时间,不同浓度的替莫唑胺干预人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞,随着药物浓度的升高,Livin mRNA表达逐渐下降(P0.05),ABCG2 mRNA表达逐渐增高(P0.05)；相同浓度的替莫唑胺干预人脑胶质瘤人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞,随着干预时间的延长,Livin mRNA表达逐渐下降,ABCG2 mRNA表达逐渐升高。人脑胶质瘤TJ90干细胞中Livin mRNA表达量低于其同源细胞,而ABCG2 mRNA表达量高于其同源细胞(P0.05)；且在不同药物浓度的与时间的干预下人脑胶质瘤TJ905细胞中Livin mRNA下降率明显高于其干细胞、ABCG2 mRNA上升率明显低于其干细胞。结论：替莫唑胺能有效抑制人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞中Livin mRNA的表达,诱导ABCG2 mRNA表达增高,促使人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞细胞周期停滞,促进细胞凋亡,抑制人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞增殖。人脑胶质瘤TJ905干细胞比其同源细胞对替莫唑胺的耐药性强；解释了人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞的抗药机制。
【关键词】：胶质瘤 TJ905干细胞 替莫唑胺 Livin ABCG2
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-13
• 第一部分 人脑胶质瘤TJ905细胞系中脑肿瘤干细胞的培养、分离与鉴定13-27
• 1 材料与方法13-20
• 1.1 材料13
• 1.2 主要仪器和试剂13-15
• 1.3 研究方法15-20
• 2 结果20-24
• 2.1 人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞形态变化20-23
• 2.2 人脑胶质瘤TJ905干细胞及其诱导分化细胞免疫荧光染色鉴定23-24
• 3 讨论24-27
• 第二部分 替莫唑胺对人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞增殖特性和细胞迁移能力的影响27-43
• 1 材料与方法27-34
• 1.1 研究对象27
• 1.2 主要仪器和试剂27-29
• 1.3 研究方法29-34
• 2 结果34-41
• 2.1 TMZ对人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞的形态学改变34-36
• 2.2 TMZ对人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞的生长抑制作用36-41
• 3 讨论41-43
• 第三部分 替莫唑胺对人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞Livin、ABCG2的影响43-60
• 1 材料与方法43-50
• 1.1 材料43
• 1.2 主要仪器和试剂43-46
• 1.3 研究方法46-50
• 2 结果50-56
• 2.1 人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞细胞周期变化测定50-55
• 2.2 人脑胶质瘤TJ905细胞及其干细胞Livin及ABCG2 mRNA表达量测定55-56
• 3 讨论56-60
• 全文结论60-62
• 附图62-63
• 参考文献63-70
• 综述：胶质瘤干细胞研究进展70-80
• 参考文献76-80
• 附录80-82
• 攻读学位期间发表论文情况82-83
• 致谢83-84
• 基金84-85
• 个人简历85

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 王志刚;姜彬;孟庆虎;郝晓光;丁璇;李纪森;;人脑胶质瘤干细胞的分离和脑瘤浸润动物模型的建立[J];山东大学学报(医学版);2012年05期

2 Toshiyuki Ishiwata;Yoko Matsuda;Zenya Naito;;Nestin in gastrointestinal and other cancers: Effects on cells and tumor angiogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2011年04期

3 Carsten Hagemann;Jelena Anacker;Ralf-Ingo Ernestus;Giles H Vince;;A complete compilation of matrix metalloproteinase expression in human malignant gliomas[J];World Journal of Clinical Oncology;2012年05期

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本文编号：419046