MLKL在脑缺血再灌注损伤后作用及机制研究

发布时间：2017-06-08 09:03

  本文关键词：MLKL在脑缺血再灌注损伤后作用及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:1、观察脑缺血再灌注损伤中MLKL蛋白含量的变化;2、观察MLKL的抑制剂NSA对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响;3、研究NSA对脑缺血再灌注损伤中MLKL的影响及相关机制。方法:将雄性ICR小鼠随机分为假手术(Sham)组、缺血再灌注(I/R)组,建立小鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery model,MCAO)模型,缺血30分钟后,在不同再灌注时间点取缺血再灌注损伤部位脑组织为标本,采用Western blot方法检测不同时间点的缺血脑组织中MLKL蛋白表达量的改变;小鼠随机分为假手术(Sham)组、假手术+NSA(Sham+NSA)组、缺血再灌注(I/R)组和缺血再灌注+NSA(I/R+NSA)组,缺血前30分钟给予NSA处理,采用神经行为学评分评估NSA对小鼠缺血再灌注损伤后神经行为功能的影响;采用TTC染色法检测NSA对再灌注损伤后小鼠脑梗死体积的影响;采用Western blot法及免疫荧光染色测定MLKL蛋白在缺血再灌注损伤后的含量变化;采用Western blot法检测NSA对凋亡相关蛋白cleaved PARP-1的影响;采用RT-PCR检测NSA干预后,MLKL的m RNA水平的变化;采用免疫共沉淀检测NSA对MLKL蛋白的泛素化降解的影响。结果:与Sham组相比,I/R组中MLKL蛋白在缺血再灌注6小时开始增加,在缺血再灌注24小时明显增加,并随着时间的延长持续增加,在缺血再灌注48小时增加最多(P0.05),随后至72小时、7天时含量逐渐减少至很低的水平;与I/R组相比,NSA干预可明显改善小鼠脑缺血再灌注损伤后的神经行为功能;给予NSA干预后,小鼠脑缺血再灌注损伤后脑梗死体积也显著减少;NSA的干预可减少小鼠缺血再灌注损伤后MLKL蛋白的含量,但是不影响MLKL蛋白的m RNA的水平;与I/R组相比,NSA明显增加缺血再灌注损伤中泛素化的MLKL蛋白,也使cleaved PARP-1蛋白表达增多(P0.05)。结论:我们的研究首次表明,MLK蛋白在脑缺血再灌注损伤中发挥着重要的作用,在脑缺血再灌注损伤后含量明显增多;MLKL蛋白的抑制剂NSA对脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用;NSA通过促进MLKL蛋白的泛素化途径降解,减少脑缺血组织中MLKL蛋白的含量,而且凋亡蛋白cleaved PARP-1的表达也升高,不仅减少了细胞坏死,也将细胞坏死向细胞凋亡转换,从而对脑缺血缺氧损伤发挥显著的保护作用,这一发现提示我们,MLKL蛋白将为该类疾病的治疗提供新的靶点。
【关键词】：Necrosulfonamide MLKL 缺损再灌注损伤 坏死性凋亡
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 第一部分：脑缺血再灌注损伤中MLKL蛋白含量的变化11-20
• 材料和方法11-18
• 结果18-19
• 小结19-20
• 第二部分NSA对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响20-25
• 材料和方法20-22
• 结果22-24
• 小结24-25
• 第三部分NSA对脑缺血再灌注损伤中MLKL的影响及相关机制25-36
• 材料和方法25-31
• 结果31-35
• 小结35-36
• 讨论36-37
• 结论37
• References37-41
• 综述41-50
• 参考文献47-50
• 中英文缩略词表50-51
• 攻读学位期间公开发表的论文51-52
• 致谢52-53

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本文编号：431994