朊蛋白mRNA IRES的初步确定及安徽阜阳和浙江宁波发热病人混合病毒感染情况调查

发布时间：2017-06-25 08:05

  本文关键词：朊蛋白mRNA IRES的初步确定及安徽阜阳和浙江宁波发热病人混合病毒感染情况调查，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：朊病毒病(prion diseases),又称可传播性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies, TSEs)。人类朊病毒病分为散发型克雅氏病(sCJD)、新型变异型克雅氏病(nvCJD)、库鲁病(Kuru)和遗传型朊病毒病等。朊病毒病的致病因子为一种人和动物细胞自身基因编码的异常折叠的不含有核酸的蛋白质。人和动物细胞自身基因编码的正常蛋白质,不具有感染性,这种蛋白质称之为朊蛋白(prion protein),简称PrP。而异常折叠的朊蛋白称之为PrPSc (Scrapie PrP),具有感染性。正常朊蛋白在一定条件下可以转化成PrPSc从而引起朊病毒病的发生。在细胞翻译的过程中存在2种启动蛋白翻译的途径：帽样结构和核糖体内部进入位点(IRES)。IRES起始的蛋白翻译,可导致细胞的同一种mRNA表达不同分子量大小的蛋白。为探讨朊蛋白在细胞内的翻译机制是否存在内部核糖体进入位点起始的翻译,本研究构建了糖基化位点突变、信号肽和GPI缺失的C端带有GFP的多种PrP真核表达载体。转染293T细胞和H1-HeLa细胞检测PrP蛋白检测mRNA是否存在IRES,结果显示PrP蛋白出现多种分子量形式,提示PRNP的mRNA存在IRES起始PrP蛋白翻译过程。结合18S rRNA螺旋区26互补配对的GGG序列预测、IRES Luc-双表达和Western Blot方法初步鉴定出PrP mRNA的IRES区域为197-324bp、400-459bp、496-612 bp、613-636bp和637-693 bp。使用内质网应激诱导剂刺激发现衣霉素能诱导PrP mRNA IRES依赖的PrP蛋白表达水平增加,且带型没有改变;而Brefeldin A和毒胡萝卜素诱导PrP mRNA IRES依赖的PrP蛋白表达水平未见明显增加；通过RNAi抑制内质网应激的三条通路发现IRE1和PERK两条通路而不是ATF6可调节PrP mRNA的IRES起始的蛋白质翻译。该研究为朊病毒病的发病机制的研究奠定一定的基础。发热是病毒性传染病重要的症状之一,而发热病人的血清中的病毒IgM分析是判断发热病因的重要手段之一。为了了解安徽阜阳和浙江宁波发热病人是否合并其它病毒感染及合并感染的病毒种类,我们收集2013年冬季安徽省阜阳手足口病住院患儿45例(均伴有发热症状)和浙江省宁波发热病人105例,检测患者血清中6种常见病毒IgM抗体,分析两地发热病人病毒感染情况。手足口病(hand foot and mouthdisease, HFMD)是流行于多个国家的一种常见的儿童疾病,以学龄前儿童比较常见,尤其是3岁以下的儿童更容易感染。引起手足口病的病原体主要是柯萨奇A病毒(Coxsacklevirus A group, CVA)、柯萨奇B病毒(Coxsacklevirus B group, CVB)和埃可病毒(Echo virus)。其中,肠道病毒71型(enterovirus 71, EV71)是最常见的引起HFMD的病原体。为了了解安徽阜阳2013年冬季手足口病患儿合并其他病毒感染情况。我们根据手足口病病例诊断标准诊断收集2013年11月-2013年12月安徽阜阳手足口病住院病例及资料,采集患儿血清。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测血清标本中的细小病毒B19、Ⅰ型单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的IgM抗体。结果发现2013年11月-2013年12月45份手足口病患儿血清腺病毒IgM阳性30例(67.7%),呼吸道合胞病毒IgM阳性8例(17.8%),细小病毒B19IgM阳性8例(17.8%),巨细胞病毒IgM阳性3例(6.7%),单纯疱疹病毒IgM阳性1例(2.2%),血清中未检测出现副流感病毒[gM抗体。同时发现多例病例的血清中出现两种以上病毒IgM阳性现象。由此推断2013年阜阳地区冬季手足口病存在合并腺病毒、呼吸道合胞病毒和细小病毒B19等病毒感染现象。为了了解宁波发热病人的病毒混合感染情况,我们收集了2014年6月-2015年6月间浙江省宁波市的发热病人的血清,检测患者血清中的细小病毒B19的血清中的IgM检测,同时对B19血清IgM阳性的病例进行I型单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、柯萨基病毒的IgM抗体检测,检测结果发现2014年6月-2015年6月,共检测出32份阳性病例,2014年7-8月出现21例,随后逐渐下降,2015年仅有3例,提示2014年出现B19病例暴发。通过B19病毒DNA分型检测,此次暴发为B19病毒Ⅲ型。同时,检测发现B19感染阳性血清中出现了腺病毒、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒的IgM阳性病例,提示存在多种病毒混合感染。
【关键词】：PrP IRES Western Blot IREI PERK 发热 手足口病 B19 共感染 腺病毒 呼吸道合胞病毒
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R742.9
【目录】：

• 第一部分 朊蛋白mRNA IRES的初步确定5-41
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 引言9-16
• 材料与方法16-30
• 一、实验材料16-22
• 二、实验方法22-30
• 实验结果30-38
• 讨论38-40
• 第一部分 小结40-41
• 第二部分 安徽阜阳手足口病病人合并病毒感染及浙江宁波发热病人细小病毒B19感染情况调查41-61
• 摘要41-43
• Abstract43-45
• 引言45-47
• 实验材料与方法47-52
• 一、实验材料47-48
• 二、实验方法48-52
• 实验结果52-58
• 一、安徽阜阳手足口病患儿合并其他病毒感染情况分析52-55
• 二、浙江宁波B19病毒暴发情况分析55-58
• 讨论58-60
• 第二部分 小结60-61
• 参考文献61-65
• 缩略词对照表65-68
• 个人简历68-69
• 致谢69-70
• 附录70

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本文编号：481340