脂多糖引起的炎症反应对血脑屏障的影响及其作用机制的探讨

发布时间：2017-06-29 00:07

  本文关键词：脂多糖引起的炎症反应对血脑屏障的影响及其作用机制的探讨，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:1.通过LPS引起的小鼠脑组织免疫炎症反应模型,观察炎症区域BBB渗漏的变化特征。2.研究LPS导致炎症区域BBB渗漏过程中,星形胶质细胞--VEGF-A通路的可能激活途径。方法:1.体内实验部分:本实验选用健康成年雄性C57B6小鼠,随机分为4组,每组30只,分别为Sham组,LPS组,LRS(LPS抑制剂)+LPS组和Vandetanib(VEGFR2抑制剂)+LPS组。分组后,侧脑室给予LPS、LRS和Vandetanib后测定EB渗透率、紧密连接蛋白表达水平和白蛋白的渗漏及脑水肿程度评价血脑屏障破坏情况。并检测处理后星形胶质细胞激活状况,血管内皮生长因子(VEGF-A)以及IL-1β的表达情况。2.体外实验部分:本实验培养原代星形胶质细胞后分为4个组:分别为对照组(CON),LPS组,Sham组(正常BV2细胞上清液处理),LBS组(LPS刺激后BV2细胞的上清液处理)。分别在基因水平和蛋白水平上检测VEGF-A的表达水平变化。结果:1.体内实验部分:侧脑室注射LPS后,与正常对照组相比,小鼠脑组织含水增多,EB、白蛋白渗漏增加,紧密连接蛋白Claudin-5表达水平下降,星形胶质标记物(GFAP)、细胞因子VEGF-A、IL-1β表达水平升高,以上差异均有统计学意义(P0.05)。给予LRS预处理后,白蛋白、EB渗透,紧密连接蛋白Claudin-5和GFAP表达水平与sham组相比无明显差异。给予Vandetanib预处理后,同LPS组相较,小鼠脑组织含水、EB渗透率、紧密连接蛋白Claudin-5表达水平、星形胶质标记物(GFAP)表达水平、细胞因子VEGF-A、IL-1β表达水平均具有明显变化,差异有统计学意义(P0.05)。2.体外实验部分:鉴定原代星形胶质培养成功,LPS组与对照组相比,VEGF-A无论基因水平还是蛋白水平表达都无明显改变(P0.05)。若直接给予正常培养的小胶质细胞上清液,VEGF-A表达水平也未见明显改变(P0.05)。但是给予LPS诱导激活的小胶质细胞上清液刺激原代星形胶质细胞,发现VEGF-A表达水平明显上升,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.脑室注射LPS能够导致BBB的破坏、星形胶质细胞活化及VEGF-A分泌增加,VEGF-A受体2阻断剂Vandetanib能够明显减弱上述变化,提示LPS通过刺激星形胶质细胞--VEGF-A通路导致BBB异常开放。2.LPS能够直接作于星形胶质细,引起星形胶质细胞活化,但此时活化的星形胶质细胞VEGF-A表达无明显变化,说明LPS对星形胶质细胞VEGF-A表达无直接影响;活化的小胶质细胞上清液刺激,星形胶质细胞VEGF-A表达则显著增加。提示活化的小胶质细胞在分泌少量VEGF-A的同时,还能够分泌细胞因子(如IL-1β、TNF-α),从而激活星形胶质细胞--VEGF-A通路,导致大量VEGF-A的释放。
【关键词】：脂多糖 血脑屏障 血管内皮生长因子 星形胶质细胞 炎症反应
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R741
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语10-11
• 前言11-13
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 一、LPS对小鼠血脑屏障的影响及其作用机制的体内研究13-31
• 1.1 材料和方法13-21
• 1.1.1 实验动物13
• 1.1.2 主要实验装置及耗材13-14
• 1.1.3 实验方法14-21
• 1.1.4 统计学处理21
• 1.2 结果21-28
• 1.2.1 干湿重法测得脑含水量情况21-22
• 1.2.2 侧脑室注射后小鼠脑EB渗透率22-23
• 1.2.3 侧脑室注射后小鼠脑免疫荧光23-25
• 1.2.4 WB测得相关蛋白表达情况25-28
• 1.3 讨论28-30
• 1.3.1 血脑屏障与中枢神经系统疾病28-29
• 1.3.2 血管内皮生长因子对血脑屏障的影响29-30
• 1.4 小结30-31
• 二、LPS对星形胶质细胞VEGF-A分泌的影响的体外研究31-46
• 2.1 材料和方法31-39
• 2.1.1 主要仪器31-32
• 2.1.2 主要试剂耗材32-33
• 2.1.3 实验方法33-39
• 2.2 结果39-43
• 2.2.1 原代星形胶质细胞培养结果39-40
• 2.2.2 各组星形胶质细胞处理后VEGF-A mRNA表达情况40
• 2.2.3 ELISA测得VEGF-A蛋白表达情况40-41
• 2.2.4 测得相关蛋白表达情况41-43
• 2.3 讨论43-45
• 2.4 小结45-46
• 结论46-47
• 参考文献47-54
• 发表论文和参加科研情况说明54-55
• 综述 血脑屏障和神经免疫55-66
• 综述参考文献59-66
• 致谢66-67
• 个人简历67

  本文关键词：脂多糖引起的炎症反应对血脑屏障的影响及其作用机制的探讨，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：495788