Dynamin 1的磷酸化状态与癫痫发作的相关性研究

发布时间：2017-07-02 12:13

  本文关键词：Dynamin 1的磷酸化状态与癫痫发作的相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:Dynamin 1是一种与癫痫有关的内吞相关蛋白。当神经元活性增高发生高频放电时,它可以被去磷酸化并介导一种大容量的突触囊泡内吞模式,以适应陡然增高的突触传递压力,调节突触囊泡循环。本研究旨在探讨不同浓度的抑制剂和激动剂干预dynmain 1是否会影响锂-匹鲁卡品诱导的在体大鼠癫痫发作及4-氨基吡啶(4-AP)诱导的离体脑片动作电位(AP)的连续爆发,进一步明确急性癫痫发作后各实验组大鼠海马中dynamin 1及磷酸化dynamin 1蛋白表达水平,以探究不同磷酸化状态的dynamin 1与癫痫发作的关系。方法:本项研究通过侧脑室注射dynamin 1抑制剂dynasore(不同浓度)和激动剂磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2),观察锂-匹鲁卡品诱导的大鼠癫痫发作模型的行为学变化。采用western blot检测各实验大鼠海马组织中dynamin 1蛋白及磷酸化dynamin 1蛋白表达水平。采用全细胞膜片钳技术研究dynasore(不同浓度)和PIP2对4-AP诱发的大鼠离体脑片持续爆发的动作电位的影响。结果:研究发现在匹鲁卡品诱导的大鼠癫痫发作模型中,100及160μM(中浓度)的dynasore能有效抑制大鼠的癫痫发作:发作率降低,发作潜伏期延长,发作的严重程度减轻;PIP2对大鼠癫痫发作率和潜伏期无影响,但能加重癫痫发作的严重程度。Dynasore能使癫痫发作后大鼠海马中dynamin 1磷酸化水平升高,也以中浓度组升高最明显;但PIP2组海马中dynamin 1的磷酸化水平却无明显改变。研究还发现用4-AP诱导大鼠海马脑片CA1区椎体神经元出现持续爆发的动作电位后,浓度为10及20μM(中浓度)的dynasore能明显减少动作电位频率;但PIP2对动作电位频率无影响。结论:我们的研究发现中浓度dynamin 1抑制剂dynasore能抑制体内匹鲁卡品诱导的大鼠癫痫发作(100、160μM),和体外4-AP诱发的脑片动作电位的持续爆发(10、20μM),激动剂PIP2能加重大鼠癫痫发作严重程度。100、160μM(中浓度)的dynasore还可升高急性癫痫发作后大鼠脑组织内磷酸化dynamin 1蛋白水平而不是总的dynamin 1蛋白水平。然而激动剂PIP2的使用却未能对dynamin 1的表达产生影响。这些结果表明dynamin 1的磷酸化状态与癫痫发作密切相关,一定范围内抑制dynamin 1的活性可能改变其磷酸化和去磷酸化蛋白的表达水平,进而影响突触囊泡内吞,导致神经元兴奋性改变,最终调节癫痫发作的进程。
【关键词】：dynamin 1 dynasore 磷脂酰肌醇-4 5-二磷酸 去磷酸化 癫痫发作
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R742.1
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 1 材料与方法12
• 2 大鼠行为学实验12
• 3 主要仪器与试剂12
• 4 氯化锂-匹鲁卡品模型及分组12-13
• 5 标本收集处理13
• 6 主要仪器与试剂13
• 7 处理方法13-14
• 8 western blot 实验14
• 9 主要仪器与试剂14-15
• 10 主要液体及其制备15
• 11 制备蛋白样品15-16
• 12 电泳16
• 13 转膜和封闭16-17
• 14 一抗孵育17
• 15 二抗孵育17
• 16 化学显影17-18
• 17 图片分析18
• 18 全细胞膜片钳实验18
• 19 主要仪器与试剂18
• 20 液体配方18-19
• 21 制备脑片19
• 22 记录动作电位19-20
• 23 数据处理20
• 24 数据统计分析20
• 25 结果20
• 26 Dynamin 1 抑制剂（不同浓度）及激动剂对大鼠在体痫样发作的影响20-21
• 27 Dynamin 1 抑制剂（不同浓度）及激动剂对 dynamin 1 蛋白及其磷酸化水平的影响21
• 28 Dynamin 1 抑制剂（不同浓度）、激动剂对离体脑片神经元爆发性动作电位的影响21-22
• 29 讨论22-25
• 全文总结25-26
• 参考文献26-29
• 附图29-33
• 文献综述33-39
• 参考文献36-39
• 致谢39-40
• 硕士期间发表的论文40

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