HER2基因对恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞株增殖和侵袭的影响

发布时间：2017-07-19 17:24

  本文关键词：HER2基因对恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞株增殖和侵袭的影响

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【摘要】：目的:观察HER2基因是否影响恶性脑膜瘤细胞的增殖、侵袭,探讨HER2是否通过MAPK信号通路发挥作用。方法:1、通过病毒感染分别将沉默和过表达HER2基因质粒转染至恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞株中。实验分组:第一组:空白组(Blank);第二组:沉默阴性对照组(NC-sh);第三组:沉默HER2基因组(HER2-sh);第四组:过表达阴性对照组(NC-ox);第五组:过表达HER2基因组(HER2-ox)。使用q-PCR和Werstern blot检测各组细胞HER2 m RNA和蛋白表达水平。2、MTT、EdU法检测各组细胞的生长增殖情况;Transwell小室侵袭法、细胞划痕实验法检测各组细胞侵袭、迁移能力;流式细胞术检测各组细胞的细胞周期、凋亡变化。3、Western blot检测各组细胞ERK1/2、P-ERK1/2、JNK、P-JNK、ERK5、P-ERK5、P38、P-P38、ras蛋白的表达。4、体内裸鼠成瘤实验检测各组细胞增殖、侵袭的变化。结果:1、慢病毒转染成功,HER2在mRNA和蛋白水平达到分组要求。2、沉默HER2组细胞增殖能力减弱,侵袭、迁移能力降低;过表达HER2组细胞增殖能力增强,侵袭、迁移能力提高。HER2基因通过影响细胞周期中的G0/G1-S的变化而起作用;沉默HER2组脑膜瘤细胞凋亡率增加,过表达HER2组脑膜瘤细胞凋亡率降低。3、沉默和过表达HER2基因可影响恶性脑膜瘤细胞中MAPK信号通路ERK1/2、P-ERK1/2、JNK、P-JNK、ERK5、P-ERK5、ras蛋白的表达,差异有统计学意义,但对P38、P-P38蛋白的表达影响不大,差异无统计学意义。4、裸鼠成瘤实验,沉默HER2组,裸鼠成瘤能力减弱,瘤体增殖速度减慢;过表达HER2组,裸鼠成瘤能力增强,瘤体增殖速度加快,细胞侵袭、迁移能力增强。结论:1、HER2可促进恶性脑膜瘤细胞的增殖和侵袭;2、HER2基因可能通过MAPK信号通路影响恶性脑膜瘤细胞的生长、侵袭功能。
【关键词】：恶性脑膜瘤 HER2 MAPK 增殖 侵袭
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.45
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文缩略词表10-13
• 第1章 引言13-15
• 第2章 体外实验观察HER2基因对恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞株增殖和侵袭的影响15-53
• 2.1 材料与方法15-38
• 2.1.1 恶性脑膜瘤细胞培养15-16
• 2.1.2 沉默和过表达HER2基因质粒构建16-22
• 2.1.3 慢病毒包装22-24
• 2.1.4 慢病毒感染24-25
• 2.1.5 流式细胞仪检测细胞转染效率25-26
• 2.1.6 q-PCR检测各组脑膜瘤细胞HER2 mRNA的表达情况26-29
• 2.1.7 Western blot检测各组脑膜瘤细胞HER2、ERK1/2、P-ERK1/2、JNK、P-JNK、ERK5、P-ERK5、P38、P38蛋白表达情况29-34
• 2.1.8 MTT、EdU标记法、细胞周期和凋亡实验检测各组细胞生长增殖、周期、凋亡情况34-36
• 2.1.9 Tanswell小室侵袭和细胞划痕实验检测细胞侵袭、迁移情况36-37
• 2.1.10 统计学处理与分析37-38
• 2.2 结果38-53
• 2.2.1 沉默HER2基因质粒测序38-40
• 2.2.2 过表达HER2基因质粒测序40-42
• 2.2.3 慢病毒转染恶性脑膜瘤细胞MOI值的确定及转染率的测定42-44
• 2.2.4 q-PCR检测各组细胞HER2 mRNA的表达情况44-45
• 2.2.5 Western blot检测各组细胞HER2蛋白的表达情况45-46
• 2.2.6 MTT检测各组细胞生长曲线46
• 2.2.7 EdU标记法检测细胞DNA增殖情况46-47
• 2.2.8 Transwell小室侵袭法检测各组细胞侵袭能力47-48
• 2.2.9 细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力48-49
• 2.2.10 流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化49-51
• 2.2.11 Western blot检测各组细胞MAPK信号通路中主要蛋白表达水平51-53
• 第3章 体内实验观察HER2基因对恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞株增殖和侵袭的影响53-60
• 3.1 材料与方法53-56
• 3.1.1 实验动物53
• 3.1.2 主要实验试剂53-54
• 3.1.3 主要实验仪器54
• 3.1.4 裸鼠饲养准备54-55
• 3.1.5 恶性脑膜瘤细胞裸鼠接种55
• 3.1.6 免疫组织化学法检测各组鼠瘤HER2表达情况55-56
• 3.1.7 结果判定56
• 3.1.8 数据处理、统计学分析56
• 3.2 结果56-60
• 3.2.1 荷瘤裸鼠生长情况56-57
• 3.2.2 荷瘤裸鼠的肿瘤生长曲线57-58
• 3.2.3 荷瘤裸鼠的瘤重和抑瘤率58-59
• 3.2.4 免疫组织化学法检测各组肿瘤HER2蛋白表达水平59-60
• 第4章 讨论60-67
• 4.1 寻找新途径治疗恶性脑膜瘤的必要性60
• 4.2 HER2在脑膜瘤中的研究现状60-61
• 4.3 沉默HER2基因和过表达HER2基因恶性脑膜瘤稳定细胞株模型的建立61-62
• 4.4 HER2基因对恶性脑膜瘤增殖的影响62-63
• 4.5 HER2基因对恶性脑膜瘤侵袭的影响63-64
• 4.6 HER2在恶性脑膜瘤中发挥作用的可能机制64-65
• 4.7 存在的问题与展望65-67
• 第5章 结论67-68
• 致谢68-69
• 参考文献69-73
• 攻读学位期间的研究成果73-74
• 综述74-81
• 参考文献79-81

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 王淳良;梅金红;王珊珊;徐姗;徐林林;熊一峰;;HER2状态与脑膜瘤分级及复发的相关性[J];中华病理学杂志;2010年03期

2 杨玄勇;王淳良;梅金红;徐姗;王珊珊;;荧光原位杂交检测脑膜瘤中HER2基因状态[J];中华实验外科杂志;2009年11期

3 雷宇华;廖峥嵘;赵娟;王忠海;;认识小干扰RNA、微RNA和RNA干扰[J];生物学教学;2009年08期

4 王珊珊;梅金红;王淳良;徐姗;徐林林;熊一峰;张宝红;;HER2、Ki-67、TK1蛋白在脑膜瘤中的表达[J];江西医学院学报;2009年04期

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1 胡雪梅;HER-2/neu小分子干扰RNA对脑膜瘤细胞增殖活性的影响[D];南昌大学医学院;2013年

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本文编号：564018