阿托伐他汀预处理对局灶性脑缺血鼠脑水肿及AQP4表达的影响

发布时间：2017-07-30 20:13

  本文关键词：阿托伐他汀预处理对局灶性脑缺血鼠脑水肿及AQP4表达的影响

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【摘要】：目的:研究阿托伐他汀预处理对局灶性脑缺血大鼠脑水肿和AQP4表达的影响,探讨其治疗缺血性脑水肿的可能作用机制。方法:51只成年雄性SD大鼠随机均分为假手术(Sham)组、脑缺血(MCAO)组和阿托伐他汀治疗(Ator)组。Ator组于术前7天始予阿托伐他汀混悬液20mg/kg/d灌胃治疗,余两组均给予等量生理盐水匹配。除Sham组外,MCAO组和Ator组均采用经典线栓法加以改良建立大鼠永久性大脑中动脉阻塞模型。术后24小时对三组大鼠行改良神经功能评分(modified neurological severity scores,m NSS),采用2%2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色法检验脑梗死,湿干重比测定脑组织含水量,免疫组织化学法和Western blot法检测缺血周边区磷酸化p38MAPK(phosphorylated-p38MAPK,p-p38MAPK)和AQP4的表达,实时荧光定量PCR测定p38MAPK和AQP4的m RNA表达水平。结果:(1)行为学评分:MCAO组大鼠m NSS(11.00?1.90)明显高于Sham组(0分),差异显著(P0.001);Ator组m NSS(8.76?1.60)低于MCAO组,差异具有统计意义(P0.001)。(2)脑梗死体积:Sham组脑片双侧均匀红染,MCAO组缺血侧脑片可见大面积的白色梗死灶,梗死体积为23.84%,Ator组脑片梗死体积(13.26%)明显低于MCAO组。(3)脑组织含水量:MCAO组左侧脑组织含水量(83.85?1.44)明显高于Sham组(78.47?1.47),差异显著(P0.001)。Ator组脑组织含水量(81.14?1.28)减少,与MCAO组相比差异有统计意义(P=0.017)。(4)m RNA基因表达:与Sham组相比,MCAO组缺血灶周p38MAPK m RNA、AQP4 m RNA表达显著上调,差异明显(P0.01),而Ator组的基因表达较MCAO组下调,差异也有统计意义(P0.05)。(5)细胞和蛋白表达:MCAO组缺血灶周p-p38MAPK和AQP4的细胞和蛋白表达明显高于Sham组,差异具有显著性(P0.01),Ator组灶周p-p38MAPK和AQP4的阳性表达明显低于MCAO组,差异也具有显著性(P0.05)。结论:(1)脑缺血增加了大鼠m NSS和缺血侧脑组织含水量,梗死灶周p38MAPK和AQP4的m RNA表达显著上调,p-p38MAPK和AQP4的阳性细胞和蛋白表达也显著增加。(2)阿托伐他汀可降低脑组织含水量,缺血灶周p38MAPK和AQP4的m RNA表达显著下调,同时p-p38MAPK、AQP4的阳性细胞和蛋白表达也减少,神经功能症状却得以显著改善。(3)阿托伐他汀可能通过抑制p38MAPK途径,降低AQP4表达,从而减轻缺血性脑水肿。
【关键词】：阿托伐他汀 脑缺血 脑水肿 水通道蛋白4 磷酸化p38MAPK
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料和方法12-24
• 2.1 主要试剂和材料12-13
• 2.1.1 主要实验试剂12-13
• 2.1.2 主要实验器材13
• 2.2 实验动物和分组13-14
• 2.2.1 动物选择与饲养13-14
• 2.2.2 实验分组与干预14
• 2.3 局灶性脑缺血模型鼠的制备和判断14-16
• 2.3.1 线栓制备14
• 2.3.2 手术步骤14-15
• 2.3.3 判断建模是否成功15-16
• 2.4 神经功能评分16-17
• 2.5 TTC染色检测脑梗死体积17
• 2.6 脑组织含水量测定17
• 2.7 免疫组化测定脑组织中p-p38MAPK、AQP4的表达17-18
• 2.8 Western blot检测脑组织中p-p38MAPK和AQP4的表达18-21
• 2.8.1 蛋白提取18-19
• 2.8.2 制备电泳凝胶19-20
• 2.8.3 蛋白电泳与转膜20
• 2.8.4 蛋白免疫杂交20
• 2.8.5 发光反应20-21
• 2.8.6 膜再生检测内参21
• 2.8.7 蛋白条带密度扫描分析21
• 2.9 实时荧光定量PCR21-23
• 2.9.1 总RNA提取21-22
• 2.9.2 cDNA合成22
• 2.9.3 RT-qPCR22
• 2.9.4 计算方法22-23
• 2.10 统计分析23-24
• 第3章 结果24-33
• 3.1 阿托伐他汀改善大鼠行为症状和降低mNSS24
• 3.2 验证阿托伐他汀降低脑梗死体积24-25
• 3.3 阿托伐他汀改善缺血侧脑组织含水量25-26
• 3.4 阿托伐他汀降低p-p38MAPK、AQP4的细胞表达26-28
• 3.5 阿托伐他汀降低p-p38MAPK和AQP4的蛋白表达28-30
• 3.6 阿托伐他汀下调p38MAPK和AQP4的mRNA表达30-33
• 第4章 讨论33-36
• 第5章 结论36-37
• 致谢37-38
• 参考文献38-41
• 攻读学位期间的研究成果41-42
• 综述42-48
• 参考文献47-48

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本文编号：595922