C3SP1-PGL3重组质粒的构建及其在PC12细胞中的表达

发布时间：2017-08-06 03:08

  本文关键词：C3SP1-PGL3重组质粒的构建及其在PC12细胞中的表达

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【摘要】：目的:构建含有SP1结合位点的C3启动子的荧光素酶重组质粒。通过瞬时转染证明导入载体的目的基因具有高效的启动子活性。方法:以SF级雄性大鼠的大脑总DNA为模板,根据Genbank中含有SP1结合位点的C3启动子的核苷酸序列设计引物,对大鼠C3基因的启动子进行特异性扩增。以原始质粒p GL3为载体,利用Gibson Assembly连接目的片段和酶切质粒进行分子重组,通过PCR鉴定、酶切鉴定以及测序鉴定后,将该重组质粒通过脂质体介导,转染PC12细胞。活体成像检测和双荧光素酶活性检测得重组质粒的萤火虫荧光素酶活性。结果:PCR鉴定、酶切鉴定表明表达载体p GL-3中插入了含有SP1结合位点的C3启动子基因片断,测序结果表明编码框正确。在PC12细胞中表达出高效的启动子活性。结论:获得能够在PC12细胞内高效表达萤火虫荧光素酶的重组质粒C3SP1-p GL3。
【作者单位】： 福建中医药大学;
【关键词】： 启动子C 重组质粒 PC 转染
【基金】：国家自然科学基金项目(81473382) 福建省科技厅重点项目(2014Y4004)
【分类号】：R743.3
【正文快照】： 脑卒中(stroke)是严重威胁中老年人健康的常见病,因其发病率高、死亡率高、复发率高、致残率高及并发症多“四高一多”的特点,已经成为严重危害人类健康的疾病之一[1,2]。研究表明,脑缺血可触发涉及炎性因子的炎症反应[3,4],炎症反应作为脑卒中发病机制的关键因素之一,参与动

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