P38MAPK抑制剂对实验性自身免疫性脑脊髓炎保护作用的病理学研究及机制探讨

发布时间：2017-08-08 09:29

  本文关键词：P38MAPK抑制剂对实验性自身免疫性脑脊髓炎保护作用的病理学研究及机制探讨

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【摘要】：目的:多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种中枢神经系统白质的炎性脱髓鞘性疾病,其发病机制尚无定论,近年来研究表明,MS是遗传、环境等因素共同作用而发生的自身免疫过程,其中少突胶质细胞损伤引起的髓鞘脱失是MS的主要病理特点,因此我们可以看出少突胶质细胞在MS的病理过程中起重要作用。p38MAPK是丝裂素蛋白酶激活物(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)家族中的一员,它对细胞内外的多种信号发生反应,对细胞的适应、增殖、分化、存活等有重要的调节作用,并参与多种中枢神经系统疾病的病理过程。前期的研究表明,抑制p38MAPK可以减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠神经组织的脱髓鞘,但有细胞实验研究提出,p38MAPK可以促进外周和中枢神经系统的少突胶质细胞的分化、再生。因此在EAE中,抑制p38MAPK后对少突胶质细胞系的具体影响如何仍有待进一步研究。本课题研究p38MAPK抑制剂对EAE小鼠脊髓组织髓鞘、少突胶质细胞的影响,探讨p38MAPK抑制剂对EAE模型起保护作用的机制,为MS的治疗提供新的思路。方法:以MOG35-55为抗原免疫54只C57BL/6小鼠建立EAE模型。小鼠随机分为3组,分别为正常对照组、EAE对照组、p38MAPK抑制剂干预组。自EAE免疫当天,p38抑制剂组小鼠给予SB203580 0.2mg/kg每日腹腔注射;正常对照组及EAE组小鼠给予等量的生理盐水每日腹腔注射。观察小鼠的发病情况、体重变化及神经功能评分。于免疫后第20天(约相当于小鼠发病高峰期)处死小鼠。取小鼠脊髓腰膨大部位的组织进行HE染色观察炎性细胞浸润情况,透射电镜和LFB髓鞘染色从病理学和形态学观察髓鞘脱失和轴索损伤情况,并进行p38、p-p38、olig2的免疫组织化学染色对比阳性细胞个数观察p38MAPK抑制剂对EAE小鼠细胞中p38及p-p38的影响,并进一步探究其是否可以提高olig2的表达发挥促进髓鞘再生的作用。采用SPSS13.0统计软件进行统计分析,发病率用百分数表示,组间比较采用卡方检验,计量资料以均数±标准差(±S)表示,多组计量资料均数的比较应用ANOVA方差分析,组间两两比较采用Dunnett-t检验,P0.05差异有统计学意义。结果:1各组小鼠临床表现观察:正常对照组小鼠未发病。发病高峰期p38MAPK抑制剂组小鼠与EAE组小鼠相比,其发病率、体重减轻程度及神经功能评分明显降低(P0.05)。2 HE染色:于发病高峰期EAE组、p38MAPK抑制剂组与正常对照组比较,小鼠脊髓组织中的炎性细胞浸润数明显增多(P0.05);p38MAPK抑制剂组与EAE组相比较,小鼠脊髓组织炎性细胞浸润数明显减少(P0.05)。3 LFB染色:EAE组发病高峰期可见大小不等的斑片状脱髓鞘区,脊髓白质内的蓝色髓鞘区域减少,部分甚至可见空泡样变性;p38MAPK抑制剂组发病高峰期可见些许小的髓鞘脱失区。正常对照组无脱髓鞘区。4透射电镜:发病高峰期EAE组小鼠髓鞘的层状结构排列极为松散,部分髓鞘崩解,断裂,脱失,轴索萎缩变性,结构不清晰;p38MAPK抑制剂组可见髓鞘排列松散,髓鞘崩解脱失现象及轴索萎缩变性均较少,结构尚清晰。5 p38免疫组织化学:正常对照组、EAE组及p38MAPK抑制剂组小组脊髓p38免疫阳性细胞数无明显差异(p0.05)。6 p-p38免疫组织化学:EAE组与正常对照组相比,p-p38阳性细胞数明显增多,差异有统计学意义(P0.05);p38MAPK抑制剂组p-p38阳性细胞数较正常对照组无明显差异(P0.05);p38MAPK抑制剂组与EAE组相比,阳性细胞数下降,差异有统计学意义(P0.05)。7 olig2免疫组织化学:发病高峰期p38MAPK抑制剂组免疫阳性细胞平均数目均较EAE组免疫阳性细胞平均数目增多,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:1 p38MAPK抑制剂可以延迟EAE的起病时间,降低发病率,减轻神经功能损伤的程度。2 p38MAPK抑制剂可以减轻EAE动物模型的炎性浸润,减少髓鞘的大面积脱失,促进髓鞘再生,恢复神经的传导功能。3 p38MAPK抑制剂可以抑制EAE中p38的磷酸化,从而影响其活性作用。4 p38MAPK抑制剂促进髓鞘再生的作用可能是通过促进早期少突胶质前体细胞分化实现的。
【关键词】：多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 p38MAPK抑制剂 髓鞘再生 少突胶质细胞 olig2
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R744.5
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-12
• 前言12-13
• 材料与方法13-20
• 结果20-22
• 附图22-28
• 附表28-30
• 讨论30-32
• 结论32-33
• 参考文献33-36
• 综述36-44
• 参考文献40-44
• 致谢44-45
• 个人简历45

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 郭红梅;王晓梅;;Notch信号通路在神经干细胞分化与再生的研究进展[J];中国临床神经科学;2013年04期

2 任远;王晗知;肖岚;;Wnt/β-catenin信号通路在髓鞘发育和再生过程中的作用[J];生理科学进展;2012年01期

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本文编号：639299