硫化氢通过上调BDNF-TrkB通路拮抗同型半胱氨酸诱导HT22细胞自噬

发布时间：2017-08-08 10:03

  本文关键词：硫化氢通过上调BDNF-TrkB通路拮抗同型半胱氨酸诱导HT22细胞自噬

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【摘要】：目的:本研究以同型半胱氨酸(Homocysteine Hcy)处理的HT22细胞作为细胞自噬模型,探讨硫化氢(Hydrogen sulfide H2S)是否可通过上调BDNF-TrkB通路拮抗同型半胱氨酸诱导HT22细胞自噬。方法:1、蛋白免疫印迹法(Western Bloting)法检测自噬相关蛋白LC3II/I比值、P62、Beclin-1蛋白的表达和电镜检测自噬结构确定Hcy是否能够诱导HT22细胞自噬,并建立细胞自噬模型,同时观察不同浓度的H2S是否有拮抗Hcy诱导的细胞自噬的作用。2、采用蛋白免疫印迹法(Western Bloting,WB)检测脑源性神经营养因子及受体(brain-derived neurotrophic factor,BDNF,Tyrosine kinase receptor B)蛋白的表达,观察不同浓度的Hcy对BDNF蛋白和p-Trk B/TrkB蛋白比值的作用,同时检测H2S是否能上调Hcy诱导自噬的HT22细胞中BDNF蛋白、p-TrkB/Trk B蛋白比值的表达。3、采用BDNF-TrkB抑制剂(k252a)预处理NaHS及Hcy共处理的HT22细胞,Western Blotting检测细胞自噬相关蛋白LC3II/I比值、P62、Beclin-1蛋白的表达确定抑制剂k252a是否可以逆转H2S拮抗Hcy诱导HT22细胞自噬作用。结果:1、Hcy诱导HT22细胞的自噬;Hcy(2.5、5、10 mmol/L)处理HT22细胞24h后电镜检测自噬泡的数量呈浓度依赖性增加,wb检测自噬相关蛋白lc3ii/i比值、beclin-1蛋白表达呈现浓度依赖性上调,p62蛋白表达呈现浓度依耐性下调,以上表明hcy可以诱导ht22细胞自噬。2、h2s拮抗hcy诱导ht22细胞自噬;nahs(100、200、400μmol/l)可浓度依赖性抑制hcy(5mmol/l,24h)诱导的ht22细胞中自噬泡数量的增加和自噬相关蛋白lc3ii/i比和beclin-1蛋白的上调、p62蛋白的下调,结果表明h2s可拮抗hcy诱导的ht22细胞自噬。3、h2s通过上调bdnf-trkb通路拮抗hcy诱导的ht22细胞自噬;hcy(2.5、5、10mmol/l)处理ht22细胞24小时后检测bdnf蛋白、p-trkb/trkb蛋白比值呈浓度依赖性下调,表明hcy可以抑制ht22细胞bdnf蛋白、p-trkb/trkb蛋白比值的表达。nahs(100、200、400μmol/l,24h)处理ht22细胞后浓度依赖性地上调bdnf蛋白、p-trkb/trkb蛋白比值的表达。予以nahs(400μmol/l)预处理ht22细胞半小时,然后加入hcy(5mmol/l)共同处理24小时,h2s可以逆转hcy对ht22细胞bdnf蛋白表达的抑制和p-trkb/trkb蛋白比值的下调。予以k252a(10nmol/l)预处理nahs、hcy共处理的ht22细胞后,h2s拮抗hcy诱导的ht22细胞自噬的作用被部分阻断,即相对于h2s保护组ht22细胞的自噬泡数量增加和自噬相关蛋白lc3ii/i比值和beclin-1蛋白表达上调及p62蛋白表达下调。此结果表明h2s通过上调bdnf-trkb通路拮抗hcy诱导的ht22细胞自噬。结论:h2s通过上调bdnf-trkb通路拮抗hcy诱导ht22细胞自噬。
【关键词】：硫化氢 同型半胱氨酸 细胞自噬 BDNF-TrkB通路
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R741
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-13
• 第1章 绪论13-17
• 1、同型半胱氨酸的神经毒性作用13-14
• 2、H_2S的神经保护作用14-15
• 3、脑源性神经生长因子酪氨酸激酶受体B的神经保护作用15
• 4.科学假说和研究目的15-17
• 第2章 材料和方法17-27
• 2.1 主要实验仪器17-18
• 2.2 主要实验试剂18-19
• 2.3 试剂的制备19-22
• 2.4 实验方法22-25
• 2.5 统计学处理25-27
• 第3章 实验结果27-35
• 3.1 Hcy诱导HT22细胞的自噬27-28
• 3.2 H_2S拮抗Hcy诱导HT22细胞的自噬28-30
• 3.3 Hcy 抑制HT22细胞BDNF、p-TrkB/TrkB蛋白的表达30-31
• 3.4 H2S 可上调 HT22细胞BDNF、p-TrkB/TrkB蛋白的表达31-32
• 3.5 BDNF-TrkB抑制剂（K252a）阻止H_2S拮抗Hcy诱导HT22细胞自噬32-35
• 第4章 讨论35-39
• 第5章 实验结论39-41
• 参考文献41-47
• 文献综述 自噬与脑缺血疾病研究进展47-55
• 参考文献51-55
• 硕士期间发表的论文55-57
• 致谢57

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本文编号：639390