微环境诱导iPSCs和BMSCs向神经元样细胞分化-Reelin对细胞分化和极性化的调节作用

发布时间：2017-08-16 10:14

  本文关键词：微环境诱导iPSCs和BMSCs向神经元样细胞分化-Reelin对细胞分化和极性化的调节作用

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【摘要】：目的:研究小鼠诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)和小鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)在大脑微环境的诱导下向神经元样细胞分化的过程;尤其是探讨细胞极性的关键分子Reelin蛋白对干细胞分化的影响。方法:将iPSCs和BMSCs分别与WT和Reelin缺失小鼠(reeler小鼠)的海马脑片以及两种小鼠的脑匀浆上清共培养,观察二者在脑片微环境下的细胞分化和极性化改变,揭示Reelin蛋白对细胞分化和极性化的影响。结果:与WT和Reeler小鼠脑片共培养的iPSCs和BMSCs均出现神经元样细胞的分化。二者在WT小鼠海马脑片呈双C字型海马片层化分布,同时表现出很强的方位性;而与reeler小鼠海马脑片共培养的细胞分布则无明显规律性,呈均匀分布。此外,与脑匀浆上清培养基共培养的iPSCs和BMSCs,在共培养72小时后,部分类神经元样细胞可以被神经干细胞标记物(Nestin)和神经元特异标记物(NeuN)所标记,表明他们可以分化成为功能性神经元。且在共培养初期reeler微环境培养基中神经元分化和突起生长相对滞后。结论:在大脑微环境的诱导下,iPSCs和BMSCs可以向神经元样细胞,甚至功能性神经元分化,Reelin蛋白参与了细胞极性化过程,Reelin缺乏可造成神经细胞极性紊乱,并对神经元分化及突起生长有一定影响。
【关键词】：诱导多能干细胞 骨髓间充质干细胞 Reelin蛋白 大脑微环境 细胞分化 细胞极性化
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R741
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 引言8-10
• 1 仪器材料与实验方法10-24
• 1.1 仪器与材料10-16
• 1.1.1 实验仪器10
• 1.1.2 试剂耗材10-12
• 1.1.3 试剂配方12-16
• 1.2 实验方法16-21
• 1.2.1 BMSCs提取与鉴定16-17
• 1.2.2 iPSCs的培养17-18
• 1.2.3 细胞脑片共培养18-20
• 1.2.4 细胞-脑匀浆上清共培养20-21
• 1.2.5 免疫细胞化学标记神经元21
• 1.3 统计学处理21-24
• 2 实验结果24-34
• 2.1 脑片微环境对iPSCs和BMSCs分化和极性化的作用24-28
• 2.1.1 对照组24-25
• 2.1.2 与WT小鼠脑片共培养25-27
• 2.1.3 与reeler小鼠脑片共培养27-28
• 2.2 脑匀浆上清对iPSCs和BMSCs向神经元分化的影响28-34
• 2.2.1 对照组29
• 2.2.2 与WT小鼠脑匀浆上清共培养29-31
• 2.2.3 与reeler小鼠脑匀浆上清共培养31-34
• 3 讨论34-38
• 3.1 脑片微环境对干细胞片层化形成和极性发生的诱导作用34-35
• 3.2 脑匀浆上清可诱导干细胞向神经元分化35
• 3.3 Reelin对细胞极性产生及分化具有一定的调控作用35-38
• 4 结论38-40
• 参考文献40-44
• 文献综述-Reelin调控神经元迁移和突触发育研究进展44-58
• 参考文献52-58
• 附录58-60
• 附录A 缩略语表58-59
• 附录B 攻读学位期间发表学术论文目录59-60
• 致谢60-61

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本文编号：682705