IL-1β单克隆抗体在癫痫治疗中的价值

发布时间：2017-08-19 07:01

  本文关键词：IL-1β单克隆抗体在癫痫治疗中的价值

  更多相关文章： 癫痫 白介素-1β 白介素-1β单克隆抗体 NF-κB S100B 胶质细胞 匹罗卡品

【摘要】：研究目的:癫痫是神经科常见慢性疾病之一,其病理生理机制复杂。近年来癫痫与神经系统炎症反应及炎性介质的关系已成为研究热点,受到广泛关注。最新研究显示,包括IL-1β在内的多种炎性介质在癫痫患者及癫痫动物模型的脑组织中表达水平升高。深入研究发现IL-1β能提高神经元兴奋性、增加痫性发作可能性。本研究通过腹腔注射氯化锂、匹罗卡品建立癫痫模型,探索能否通过腹腔IL-1β单克隆抗体中和癫痫持续状态所导致IL-1β含量异常升高,观察白介素1β(IL-1β)单克隆抗体对癫痫持续状态诱导大鼠海马组织炎症反应的影响。研究方法:72只健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组(n=20)、癫痫模型组(模型组,n=26)、IL-1β单抗抗体治疗组(治疗组,n=26)。模型组和治疗组均采用氯化锂-匹罗卡品建立癫痫模型,对照组以相同液体量的生理盐水替代氯化锂、匹罗卡品。当模型组、治疗组大鼠痫性发作达到Racine分级的IV-V级发作且持续1小时后,腹腔注射溴化甲基阿托品和地西泮解除痫性发作。治疗组大鼠于癫痫发作30分钟、7天及14天后分别给予IL-1β单克隆抗体1ml(20ug?ml)腹腔注射,模型组和对照组则给予等量的生理盐水。模型组和治疗组分别于造模后72h、21d两个时间点随机取3只提取海马组织总蛋白,采用蛋白质印记法检测用药后72h、21d海马组织中IL-1β单克隆抗体的含量。各组大鼠于造模后72h随机取10只大鼠断头取脑、分离海马组织和进行腹主动脉抽血,用RT-PCR检测痫性发作72h后海马组织中IL-1β、NF-κB mRNA表达水平,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中S100B含量。各组于造模后21天,大鼠行心脏灌注固定,分离脑组织进行冰冻切片,行免疫荧光法检测海马区胶质细胞活化情况及行尼氏染色检测神经元凋亡情况。通过统计学分析比较IL-1β单克隆抗体对癫痫的干预是否有效。研究结果:1.在注射匹罗卡品10~40min后,模型组大鼠开始出现排便排尿、口角流涎、双眼充血等外周胆碱能反应;继之出现面部抽动、行动刻板、平衡力下降、行走不稳等表现;最后出现癫痫发作的典型症状:阵发性出现咀嚼或牙关紧闭、颈项强直或全身肌肉僵硬、湿狗样抖动、四肢不自主抽搐或痉挛,最终出现全身强直-痉挛发作并失去平衡、跌倒。模型组造模成功率85.29%,死亡率10.34%(68只大鼠,58只成功建立癫痫模型,其中4只在注射匹罗卡品后24h内死亡,2只在癫痫发作后48h内死亡,10只未出现典型的癫痫发作)。2.模型组大鼠海马组织中仅检测到少量il-1β抗体,考虑与抗体的交叉反应有关,治疗组中给药72h(3.797±0.021)、21d(3.584±0.024)后大鼠海马组织中il-1β单克隆抗体的浓度明显高于模型组(1.278±0.019、1.351±0.010)。与标准浓度比较发现不同时间点治疗组中il-1β单克隆抗体的浓度均3.00ugab/g。结果提示:il-1β单克隆抗体能够通过血脑屏障并能保持有效治疗浓度(3.00ugab/g)。3.模型组il-1β、nf-κb表达水平均高于对照组(均p0.01),治疗组il-1β、nf-κb表达水平均低于模型组(均p0.01)。4.对照组血清中s100b蛋白水平较低,与模型组比较,治疗组血清中s100b蛋白水平明显下降(p0.01)。5.尼氏染色显示对照组ca1区、ca3区锥体细胞、神经元排列整齐,形态完整;模型组ca1区、ca3区有神经元脱失及变形、胶质细胞增生(与对照组比较,p0.05);与模型组比较,治疗组大鼠海马ca1区、ca3区锥体细胞、神经元缺失情况显著减轻(p0.01)。6.为进一步探讨il-1β单克隆抗体对于胶质细胞增生的影响,观察造模后第21天海马区胶质细胞增生情况,利用胶质纤维酸性蛋白(gfap)、iba1抗体进行荧光双标。免疫荧光双标染色显示,正常对照组大鼠海马无胶质细胞异常增生,se21天在海马ca3区表现为gfap与iba1阳性细胞明显增多,星形胶质细胞和小胶质细胞增生现象显著(p0.05),差异有统计学意义。而治疗组GFAP与Iba1阳性细胞较模型组明显减少(p0.01)。胶质细胞活化情况显著减轻(P0.01)。结论:(1)利用氯化锂-匹罗卡品建立癫痫模型可诱导大鼠表现为典型的癫痫持续状态,模型大鼠进入慢性期后,通过尼氏染色及免疫荧光染色观察到海马CA1、CA3区出现神经元损伤、胶质细胞增生等病理改变,这些病理改变符合人难治性癫痫的典型病理改变,同时氯化锂-匹罗卡品模型的发作分期符合人类癫痫的发病特点。另外该模型实验周期短、实验条件成熟、易操作。以上证据均提示氯化锂-匹罗卡品癫痫动物模型可以作为研究癫痫发病机制、治疗方法等研究方向的重要选择之一。(2)IL-1β是最强大的促炎因子之一,其介导的信号转导途径是组织炎症反应的开始。IL-1β作为上游炎性因子能介导多种炎性因子表达上调,继而诱发下游的炎症瀑布反应,NF-κB为细胞内重要的下游信号转导介质之一,参与调节多种细胞因子的基因转录,活化的NF-κB可促进IL-1β基因转录。本实验中通过RT-PCR检测实验动物海马组织中IL-1β、NF-κB mRNA转录水平,实验结果显示:模型组IL-1β、NF-κB mRNA表达水平较正常组明显上调(p0.05),提示癫痫诱导IL-1β、NF-kB mRNA转录、免疫炎性因子介导的炎症反应在SE中发挥重要作用。(3)S100B是血脑屏障渗漏和星形胶质细胞损伤的标志物,本实验证实在癫痫模型大鼠急性期血清中S100B水平明显高于对照组,提示癫痫发作可能导致神经元、胶质细胞损伤及血脑屏障破坏。通过腹腔注射IL-1β单克隆抗体,并检测海马组织中IL-1β单克隆抗体浓度发现其能有效通过血脑屏障。癫痫模型大鼠腹腔内注射IL-1β单克隆抗体能降低血清中S100B水平及改善神经元缺失、胶质细胞活化,这提示IL-1β参与癫痫发作造成的血脑屏障破坏及脑损伤过程。(4)以癫痫发作诱导的炎症反应为靶点将可能成为未来癫痫治疗的新方向。
【关键词】：癫痫 白介素-1β 白介素-1β单克隆抗体 NF-κB S100B 胶质细胞 匹罗卡品
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.1
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 缩略语/符号说明11-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 1 对象和方法15-29
• 1.1 研究动物15
• 1.2 主要实验设备15-16
• 1.3 主要实验试剂16-17
• 1.4 主要溶液及试剂配方17-18
• 1.5 实验方法18-28
• 1.6 统计分析28-29
• 2 结果29-36
• 2.1 行为学观察29
• 2.2 Western blot 检测治疗组海马区 IL-1β 单克隆抗体的浓度29-30
• 2.3 Real Time-PCR 检测海马组织 IL-1β、NF-κB m RNA 的表达30
• 2.4 ELISA 检测各组大鼠血清中 S100B 含量30-31
• 2.5 免疫荧光双重染色法观察海马区胶质细胞活化情况31-33
• 2.6 尼氏染色法观察海马区神经元缺失情况33-36
• 3 讨论36-42
• 3.1 癫痫模型选择36-37
• 3.2 癫痫与炎症反应的关系37-39
• 3.3 癫痫与血脑屏障的关系..39-42
• 4 小结42-43
• 结论43-44
• 参考文献44-48
• 发表论文和参加科研情况说明48-49
• 综述 癫痫与细胞因子49-62
• 参考文献56-62
• 致谢62

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 余年;狄晴;;炎性反应与癫痫[J];国际神经病学神经外科学杂志;2009年04期

2 周力军;王雷;袁良津;;236例症状性癫痫病因分析[J];安徽医学;2013年08期

3 别毕洲;王东军;;VNS在抗癫痫治疗中的免疫调节作用[J];海南医学;2010年17期

4 胡勇;狄晴;;白介素-1和白介素-6与癫vN及其认知功能障碍的关系[J];中国临床神经科学;2009年06期

5 赵国梁;丁明;;血清NSE、S100β和Aβ蛋白与老年患者术后认知功能障碍关系的临床研究[J];临床麻醉学杂志;2013年10期

6 陈亮;江琳;;癫痫患者院前发作致意外伤及相关因素调查[J];护理学杂志;2014年07期

7 廖进;梁晓阳;陈礼刚;;创伤性癫痫的治疗进展[J];泸州医学院学报;2014年02期

8 黎兴键;吴智兵;于征淼;张小梅;;黄连解毒汤合定痫丸治疗阳痫大鼠的实验研究[J];河北中医;2014年09期

9 孙宏;张辉锋;吴海琴;任静;张桂莲;张茹;展淑琴;;CD40在癫痫大鼠大脑皮层及海马中的表达变化[J];中南大学学报(医学版);2015年07期

10 郑一;高玉红;吴士文;于生元;;Oligo基因芯片分析黄芪多糖对脑缺血再灌注大鼠DND的保护作用[J];山东中医杂志;2013年08期

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 树海峰;SVZ来源的神经前体细胞参与皮质发育障碍致痫机制的研究[D];第三军医大学;2010年

2 阚敏宸;右美托咪啶对电点燃癫痫大鼠的脑保护作用及机制研究[D];河北医科大学;2013年

3 贺教江;IL-17在大脑皮质发育障碍癫痫发生中的作用研究[D];第三军医大学;2013年

4 刘志广;腺苷A_1受体在癫痫发病机制中的作用及其与GABA信号通路相关性的研究[D];华中科技大学;2013年

5 叶园珍;不同发育期脑内有髓神经纤维损伤在癫痫发病机制中的作用研究[D];重庆医科大学;2013年

6 李真;HMGB1在幼年大鼠癫痫持续状态中的作用研究[D];山东大学;2013年

7 甄军丽;慢性间歇性低压低氧对癫痫大鼠的脑保护作用和机制探讨[D];河北医科大学;2014年

8 王伟;Nrf2-ARE信号通路在癫痫脑损伤中的作用及莱菔硫烷的神经保护机制研究[D];河北医科大学;2014年

9 马颂华;IL-6神经保护作用的钙离子通道机制及信号转导途径[D];苏州大学;2014年

10 李刚;左乙拉西坦对CD8~+T淋巴细胞凋亡和细胞毒性功能的影响[D];复旦大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 刘洋;癫痫患儿红细胞免疫功能与红细胞补体受体1密度相关基因多态性的关系[D];吉林大学;2011年

2 余年;炎症反应对海人酸致痫大鼠脑P-糖蛋白表达的影响：NF-κB的重要作用[D];南京医科大学;2011年

3 毛玲艳;原发性癫痫患者外周血细胞因子及CD4~+CD25~（high）调节性T细胞与癫痫严重程度的相关性研究[D];复旦大学;2010年

4 吴文娟;左乙拉西坦、拉莫三嗪对癫痫患儿血中IgA、IgG、IgM及CD3、CD4、CD8、ICAM-1水平的影响[D];河北医科大学;2012年

5 张川;急性脑梗死患者血清S100B蛋白水平的变化及其临床意义分析[D];郑州大学;2013年

6 马彩云;绿茶多酚对癫痫大鼠海马XIAP和Caspase-3表达的影响[D];河北医科大学;2013年

7 牛凤鹤;1、第一部分 颞叶癫痫的遗传易感性研究 2、第二部分 发作性运动源性手足舞蹈徐动症致病基因的筛查及突变体的功能研究[D];北京协和医学院;2013年

8 王莉;内源性大麻素在癫痫发生中的作用及机制研究[D];第四军医大学;2013年

9 刘莎莎;痫性放电信号的传递机制：实践与假说[D];重庆医科大学;2013年

10 陈蕴;丙戊酸钠、丙戊酸镁在癫痫治疗中的疗效对比[D];重庆医科大学;2013年

，

本文编号：699290