Endothelin-1诱导猕猴局部脑缺血模型的建立及缺血损伤灶周围细胞学变化的初步研究

发布时间：2017-08-21 02:04

  本文关键词：Endothelin-1诱导猕猴局部脑缺血模型的建立及缺血损伤灶周围细胞学变化的初步研究

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【摘要】：[目的]中风是世界范围内引起死亡的最常见的原因之一,而脑缺血疾病约占中风的70%-90%,其死亡率和致残率均较高。建立成功率高、可重复性好、梗死部位及面积稳定,且能较好的模拟人类脑缺血实际情况的实验动物模型,是研究其病理生理及防治方法的重要手段。Endothelin-1(内皮素-1,ET-1)在国外已被广泛应用于啮齿类动物脑缺血模型的研究,但在灵长类动物上应用的报道较少,而国内被用于脑缺血模型的研究甚少。脑缺血后神经元的死亡及伴随的反应性的胶质细胞增生和瘢痕形成,在现有的治疗方法下很难被逆转。2014年陈功等通过一种神经转录因子(NeuroDl)把小鼠脑损伤后激活的星形胶质细胞直接重编程转化为具有功能的神经元,为脑损伤治疗方面的研究提供了新的思路。本实验首次通过ET-1诱导建立猕猴局部脑缺血模型,并初步研究猕猴脑缺血后缺血灶周围细胞学的变化规律。为以后猕猴局部脑缺血模型中激活的星形胶质细胞向神经元转化的研究,提供初步的参考。[方法]1.本实验历经两次,第一次实验为摸索实验,取2只残疾猕猴(均为雄性),第二次实验取3只残疾猕猴(2只雄性,1只雌性),残疾猕猴选取标准：全身无肉眼可见畸形或者全身仅有部分肢体的部分关节畸形,但头面部正常无畸形。限于样本数,采用猕猴左右大脑半球对照,实验侧采用ET-1皮质内注射诱导局部脑缺血模型,对照侧采用生理盐水注射,方法同实验组。第一次实验实验组ET-1剂量分别0.2ug/10u1、lug/10u1、5ug/10ul,第二次实验为2.5ug/10ul、5ug/10u1、10ug/10ul。两次实验实验组及对照组溶剂均为10u1生理盐水。2.第一次实验猕猴于损伤后1周(W)、2W、3W、4W进行脑组织多聚甲醛灌注取材,第二次实验为损伤后2W、4W、6W、8W取材,后均做免疫组化,行NEUN, GFAP及IBA1荧光染色,分析实验组及对照组损伤灶周围神经元、星形胶质细胞及小胶质细胞的变化规律,其中第二次实验各猕猴另加做尼式染色分析其神经元损伤范围。[结果]1. Endothelin-1注射之后相比生理盐水对照组产生了更大范围的神经元损伤,而且造成的缺血损伤灶位置固定,为围绕注药针道的区域,不同时间段5ug/10ulET-1注药针道外神经元损伤范围较稳定,约针道外1500um。2.缺血灶周围细胞学的变化规律：时间关系：ET-1剂量为2.5ug时星形胶质细胞激活上升的过程在时间上至少持续了28d,而下降则最迟出现在56d,最高峰出现在28d和42d或者42d和56d之间,小胶质细胞的激活程度：28d42d56d,高峰可能在28d之前或者28d和42d之间。剂量为5ug时星形胶质细胞激活19d到33d是一个上升的过程,最高峰应在33d之后,小胶质细胞的激活程度：19d33d,高峰可能在19d之前或19d和33d之间。剂量为10ug时星形胶质细胞激活15d到29d是一个上升的过程,最高峰在29d之后,小胶质细胞的激活程度：15d29d,高峰可能在15d之前或15d和29d之间。每个剂量下GFAP+星形胶质细胞和IBA1+小胶质细胞激活的高峰对比,IBA1+小胶质细胞的高峰出现的均早。空间关系：各ET-1剂量、每个时间点针道附近和往外500um相北,GFAP+星形胶质细胞及IBAI+小胶质细胞的增殖程度及NEUN+神经元损伤程度是递减的,直至正常区域。剂量关系：假设三个时间段内(15d-19d,29d-33d,28d-29d),由于时间相差很近,激活的星形胶质细胞及小胶质细胞的程度变化不大。那么每个时间段,ET-1低剂量下IBA1+小胶质细胞的增殖的形态及数量均较高剂量严重。尼氏染色下随着随着ET-1剂量的增加,神经元损伤范围有增加的趋势。[结论]1. Endothelin-1皮质内注射诱导猕猴局部脑缺血模型,是一种创伤小、易定位、可重复、操作简单的、较理想的猕猴局部脑缺血模型。2.此模型缺血损伤灶周围GFAP+星形胶质细胞及IBA1+小胶质细胞变化具有时间和空间上的依赖性。3.推测随着ET-1剂量的加大,可能会导致神经元损伤范围的增加,以及相同时间点上缺血损伤灶中心处IBA1+小胶质细胞及GFAP+星形胶质细胞的增殖程度降低。
【关键词】：Endothelin-1 局部脑缺血 猕猴 星形胶质细胞 神经元小胶质细胞
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 中英文缩略词表5-7
• 摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-20
• 材料与方法20-29
• 结果29-46
• 讨论46-50
• 结论50-51
• 参考文献51-58
• 综述58-66
• 参考文献62-66
• 硕士期间发表文章66-67
• 致谢67

【参考文献】

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3 栾国明，王忠诚，戴建平，周荣，孙波，李桂林，张萍，，梁顺起，闫丽;猴急性脑缺血行动脉血静脉窦逆行灌注治疗的实验研究[J];中华神经外科杂志;1995年06期

本文编号：710159