非神经元型胆碱能系统在重症肌无力胸腺组织中的表达

发布时间：2017-09-12 19:26

  本文关键词：非神经元型胆碱能系统在重症肌无力胸腺组织中的表达

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【摘要】：目的重症肌无力(Myasthenia Gravis,MG)是一种以反复活动后横纹肌无力为临床表现的自身免疫性疾病。约80%~90%患者血清中存在乙酰胆碱受体抗体(acetylcholine receptor antibody,Ach Rab),Ach Rab与神经肌肉突触膜上的乙酰胆碱受体结合,主要通过竞争占领及补体参与等机制导致神经冲动不能下传进而导致肌无力症状。MG患者大约70%存在异常胸腺病理改变,胸腺瘤(分为A型、B型、AB型)占其的10~15%,胸腺增生占其中的50~60%。张清勇教授的研究已发现胸腺瘤和胸腺增生组织乙酰胆碱转移酶表达增高,胸腺增生组织乙酰胆碱受体表达高于胸腺瘤胸腺组织,胸腺萎缩组织乙酰胆碱受体表达低于正常胸腺组织[1]。研究发现机体免疫细胞以及上皮细胞上都存在非神经元型胆碱能系统,其主要由乙酰胆碱转移酶(choline acetyl transferase,CHAT)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholin esterase,Ach E)、n Ach R(α1-α10、β1-β4、γ)、m Ach R(m1-m5)、乙酰胆碱等组成[2]。国外研究者发现刺激n Ach R和m Ach R可以产生很多生物学以及功能的改变[3]。我们希望通过研究MG患者胸腺组织非神经元型胆碱能系统的改变,探讨其对乙酰胆碱受体抗体产生的影响。方法30例中重症肌无力患者胸腺组织,所有患者均经过临床确诊并进行胸腺切除+前纵膈脂肪组织清除术,其中男性18例,女性12例,年龄18~42岁;对照组为非自身免疫性先天性心脏病患者行开胸手术者的20例胸腺组织,年龄2~12岁。采集标本时取得患者和家属的同意,所有患者均签署知情同意书。免疫组化标本收集郑州大学第二附属医院病理科2013-2015年度130例胸腺组织石蜡切块。1.m Ach R(m1、m2、m3、m4、m5)、n Ach R(α1,α2,α3,α4,α5,α6,α7,α9,α10,β1,β2,β3,β4)、CHAT及Ach E的m RNA的检测:提取MG患者组及正常对照组胸腺组织的总RNA,通过荧光定量PCR检测m1、m2、m3、m4、m5、α1,α2,α3,α4,α5,α6,α7,α9,α10,β1,β2,β3,β4,CHAT及Ach E的m RNA表达水平,采用2-△△Ct法在MG患者组和正常对照组之间进行相对定量的比较;2.α1、α2、α9、m3以及β2分子在胸腺组织的分布与表达:制作胸腺组织石蜡切片,通过免疫组织化学了解α1、α2、α9、m3以及β2在胸腺组织的分布与表达;3.统计学分析:统计学分析使用SPSS 21..0软件。用均数±标准差(SX±)分析数据,两组均数的比较用t检验,当p0.05时差异有统计学意义。结果1.在胸腺组织中有m1、m2、m3、m4、m5、α1,α2,α3,α4,α5,α6,α7,α9,α10,β1,β2,β3,β4,CHAT及Ach E m RNA的表达:MG患者胸腺组织中的α1、α9、m3的m RNA的表达水平显著增高,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05);其中α2、β2的m RNA表达水平显著降低,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。而MG患者胸腺组织中α3,α5,α6,α7,α10,β1,β3,β4,γ,CHAT、m1,m2,m4,m5的m RNA表达水平与对照组相比较差异无统计学意义(p0.05)。2.α1、α2、α9、m3以及β2分子在胸腺细胞的分布与表达::α1、α2、α9、m3、β2的阳性表达呈现出棕黄色颗粒,主要在胞质及胞膜表达,偶尔也可在细胞核中表达。见图3.4。MG患者胸腺组织α1表达阳性,并且显著高于对照组,差异有统计学意义(p0.05);MG患者胸腺组织α2表达阳性,β2表达弱阳性,显著低于对照组,差异有统计学意义(p0.05);α9、m3在MG胸腺组织与对照组比较差异无统计学意义(p0.05)。结论MG患者胸腺组织中α1的表达水平与对照组相比显著增高,α2、β2的m RNA表达水平与对照组相比显著降低。α1、α2及β2在重症肌无力患者胸腺组织中表达均阳性,主要分布于胸腺细胞的胞膜及胞质。以上证据表明重症肌无力患者的胸腺组织费神经元型胆碱能系统发生改变。
【关键词】：重症肌无力 胸腺 非神经元型胆碱能系统 荧光定量PCR
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R746.1
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文缩略词对照表11-12
• 1 前言12-16
• 2 材料和方法16-24
• 3 结果24-27
• 4 讨论27-30
• 参考文献30-32
• 综述 非神经元型胆碱能系统32-46
• 参考文献42-46
• 个人简历46-47
• 致谢47

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