慢性不可预见性应激对脂多糖诱导炎性环境下小胶质细胞活化的影响

发布时间：2017-09-18 19:07

  本文关键词：慢性不可预见性应激对脂多糖诱导炎性环境下小胶质细胞活化的影响

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【摘要】：目的：研究慢性不可预见性应激(Chronic Unpredictable Mide Stress, CUMS)与LPS共同作用导致的皮质酮增多对NLRP3炎症小体的激活和糖皮质激素受体的表达与功能的影响,观察小胶质细胞活化介导的DA能神经元损伤的情况,并探讨其可能的机制。方法：大鼠随机分成6组,包括假手术组,LPS组,单纯CUMS组及CUMS刺激7天,14天,21天三个时间点合并LPS黑质致密部注射组CUMS (7d)+LPS、 CUMS (14d)+LPS、CUMS (21d)+LPS。LPS组和CUMS合并LPS造模组于第22天脑立体定位黑质致密部注射LPS制备大鼠PD模型,其余各组相同位置注射等量生理盐水。成模后于第29天统一观察各组的行为学指标变化情况。于第43天腹腔注射阿扑吗啡观察各组旋转情况,随即处死,取血清和组织待检。采用酶联免疫吸附试验法(ELISA),检测待测血清中肿瘤坏死因子-a (Tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1β (Interleukin 1β, L-1β)、白细胞介素-6(Interleukin-6)、皮质酮(Corticosterone, CORT)和促肾上腺皮质激素(Adrenocorticotropichormone, ACTH)的含量水平。采用免疫组织化学法(IHC-P),观察大脑黑质致密部小胶质细胞的激活和多巴胺能神经元的损伤情况。采用免疫蛋白印迹法(Western Blot),检测大脑黑质致密部半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase-1, Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-likeprotein containing CARD, ASC)、 Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(Nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3, NLRP3)白介素18(Interleukin-18, IL-18)、白介素-1β (Interleukin-18,IL-1β)以及糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor, GR)和盐皮质激素受体(Mineralocorticoid receptor,MR)的表达和功能变化。结果：1)行为学实验观察结果：和假手术组相比,LPS组,CUMS组,CUMS(14d)+LPS组和CUMS(21d)+LPS组大鼠的自发活动及探索行为均有不同程度减少。2)旋转实验观察结果：LPS和CUMS (14d)+LPS组大鼠腹腔注射阿扑吗啡均出现向受损对侧旋转的现象,且CUMS (14d)+LPS组旋转次数多于LPS组。3)酶联免疫吸附试验法检测结果：与假手术组比较,所有CUMS刺激组血清CORT与ACTH含量出现不同程度升高；与假手术组比较,LPS组大鼠血清炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明显增多,而与LPS组相比,CUMS(14d)+LPS组血清中炎性因子TNF-α, IL-1β和IL-6的含量继续升高。4)免疫组织化学法观察结果：假手术组与CUMS组大鼠黑质致密部中多巴胺能神经元细胞排列整齐,数量较多且形状固定,小胶质细胞数量较少且基本处于静息状态；而LPS组,多巴胺能神经元大多变性消失,神经元细胞胞体萎缩,形状模糊,同时小胶质细胞激活明显增多；与LPS组相比,CUMS (14d)+LPS组加重了多巴胺能神经元损伤程度和小胶质细胞激活数量。5)免疫蛋白印迹法检测结果：和假手术组相比,LPS组大鼠黑质致密部Caspase-1,ASC和NLRP-3蛋白和炎症因子IL-18, IL-1β表达水平均有所上升,且CUMS (14d)+LPS组大鼠与LPS组相比均不同程度加大了的这些指标表达水平的升高；而与假手术组相比,CUMS组、CUMS (14d)+LPS组和CUMS (21d)+LPS组大鼠黑质致密部GR和MR表达水平均出现不同程度下降。结论：慢性不可预见性应激引起GR,MR表达降低和功能失调、糖皮质激素水平升高,与LPS协同作用于小胶质细胞,通过调节NLRP3炎症小体的激活,参与小胶质细胞活化,促进促炎因子IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α等的成熟和释放,促进中枢神经系统的炎症反应,加重DA能神经元的损伤和凋亡。
【关键词】：皮质酮 小胶质细胞 NLRP3炎症小体 脂多糖 多巴胺能神经元
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R742.5
【目录】：

• 英文缩略词5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 1. 前言11-13
• 2. 实验材料13-14
• 3. 实验方法14-21
• 4. 统计学分析21-22
• 5. 结果22-30
• 6. 讨论30-33
• 7. 结论33-34
• 参考文献34-39
• 致谢39-40
• 附录40-41
• 综述41-50
• 参考文献46-50

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本文编号：877305