Plexin-B1对神经胶质瘤细胞侵袭迁移和血管生成的影响及其机制研究

发布时间：2017-09-22 12:05

  本文关键词：Plexin-B1对神经胶质瘤细胞侵袭迁移和血管生成的影响及其机制研究

  更多相关文章： Plexin-B1 胶质瘤 αvβ3 RhoA SRPK1

【摘要】：神经胶质瘤是成人中最常见的原发性颅内肿瘤,其呈浸润性生长且侵袭性极强,是预后差、易复发的富血管性实体肿瘤。目前胶质瘤治疗方法包括手术切除、放化疗、基因治疗等新生物治疗,尽管取得了一些成果但对胶质瘤预后的改善仍有限。造成这些困难的原因有多种,其中最主要的有两方面：1,胶质瘤细胞呈浸润性生长,使肿瘤组织与正常脑组织分界不清,手术不能完全切除肿瘤组织,残留的肿瘤细胞成为复发灶的种子；2,胶质瘤为富血管性实体肿瘤,丰富的血供为肿瘤细胞提供充足的养分,为其迅速增殖提供物质基础。因此,探寻有效分子标记为诊断、抑制肿瘤细胞增殖、侵袭、血管生成提供靶点,从而提高胶质瘤的治疗效果、改善预后。作为Sema4D跨膜蛋白受体的Plexin-B1起初作为神经导向分子而被广泛研究。近年来随着研究的深入,发现Plexin-B1可参与到多种细胞过程中,尤其在肿瘤的发展进程和血管生成中起到了重要的作用,已作为肿瘤诊断、分子治疗的新靶点。现有的研究表明,Plexin-B1在正常脑组织中微量表达,随着胶质瘤病理级别的增加其表达量也随之增多,可作为诊断胶质瘤的潜在分子标志物及免疫治疗的新靶点。然而,Plexin-B1在胶质瘤的进展进程中所起到的作用及相关调控机制尚未可知。为研究Plexin-B1对神经胶质瘤细胞侵袭迁移和血管生成的影响及相关机制,我们展开了相关的研究。首先,我们通过对胶质瘤细胞进行免疫组织化学染色,确定Sema4D及Plexin-B1在正常星形胶质细胞中几乎不表达,而在胶质瘤细胞中其达量显著上调。随后,我们使用shRNA抑制Plexin-B1的表达,应用RT-PCR及western blot鉴定转导是否成功,应用嘌呤霉素筛选出稳转细胞株。其次,为研究Plexin-B1对胶质瘤生长凋亡的影响,我们应用流式细胞术及线粒体膜电位检测技术研究Plexin-B1对胶质瘤凋亡的影响,实验结果表明,沉默Plexin-B1组与对照组相比,早期凋亡的瘤细胞数量明显增加,线粒体膜电位显著下降。通过构建荷瘤鼠在体成瘤,结果表明Plexin-B1沉默组瘤体大小显著小于对照组,沉默Plexin-B1可抑制胶质瘤细胞生长。再次,为研究Plexin-B1对胶质瘤侵袭及迁移能力的作用,我们应用划痕实验,Transwell小室进行侵袭和迁移实验,细胞骨架染色进行研究,并通过RT-PCR、Western blot检测α v β 3、RhoA、RhoB、RhoC、SRPK1的表达情况,免疫共沉淀检测Plexin-B1是否调控细胞骨架影响胶质瘤细胞运动,结果表明,Plexin-B1可通过影响细胞骨架而促进胶质瘤细胞侵袭及迁移,这种作用是通过激活α v β3、RhoA、SRPK1完成的。为研究Plexin-B1与SRPKl的关系,我们应用SRPK1 shRNA沉默SRPKl并证实SRPK1对α v β 、RhoA及Plexin-B1无影响。随后,我们研究了Plexin-B1、 SRPK1对胶质瘤血管生成的作用,在体环境下测量瘤组织微血管密度(MVD)并利用免疫荧光染色检测CD31表达情况,结果表明沉默Plexin-B1及SRPK1均能抑制血管生成。最后,我们探究Plexin-B1影响胶质瘤细胞生长凋亡、侵袭迁移以及血管生成的可能机制,通过RT-PCR和Western blot对PI3K、p-PI3K、Akt、 p-Akt的表达情况进行研究发现Plexin-B1可通过PI3K/Akt途径发挥作用。本研究揭示了Plexin-B1促进胶质瘤侵袭及血管生成,抑制凋亡的作用机制可能为通过调节RhoA/α V β 3/PI3K/Akt通路及SRPKl参与胶质瘤的侵袭和血管生成。本课题为胶质瘤的治疗及药物研发提供了新的思路及理论依据。
【关键词】：Plexin-B1 胶质瘤 αvβ3 RhoA SRPK1
【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 英文缩略词表4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 引言11-15
• 第一部分：Plexin-B1在胶质瘤细胞系中的表达情况及其生物学作用15-35
• 1.实验材料15-21
• 2.实验方法21-27
• 3.实验结果27-33
• 4.讨论33-35
• 第二部分：在体环境下,Plexin-B1、SRPK1对胶质瘤生长及血管生成的影响35-45
• 1.实验材料35-38
• 2.实验方法38-40
• 3.实验结果40-43
• 4.讨论43-45
• 第三部分：Plexin-B1对胶质瘤所起生物学作用的相关机制45-57
• 1.实验材料45-48
• 2.实验方法48-49
• 3.实验结果49-54
• 4.讨论54-57
• 结论57-58
• 参考文献58-64
• 综述 Semaphorins及其在胶质瘤中功能的研究进展64-74
• 参考文献69-74
• 攻读学位期间取得的成果74-75
• 致谢75

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本文编号：900714