ALK5对KA癫痫大鼠TGF-β1-ALK1-p-Smad1通路的影响

发布时间：2017-09-25 16:30

  本文关键词：ALK5对KA癫痫大鼠TGF-β1-ALK1-p-Smad1通路的影响

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【摘要】：[目的]采用海人酸致痫SD大鼠模型,通过腹腔注射ALK5抑制剂(SB431542)干扰ALK5受体,观察癫痫大鼠海马组织中ALK1及其下游分子p-Smad1的mRNA及其蛋白的表达,研究癫痫大鼠ALK5对ALK1受体的作用,探讨可能的干预癫痫发作的新靶点。[方法]红藻氨酸(kainic acid, KA)侧脑室注入SD大鼠制备癫痫模型,随机分为KA模型对照组(A组)、ALK5 Inhibitor腹腔注射3d组(B组)、ALK5 Inhibitor腹腔注射7d组(C组),另设假手术组为生理盐水对照组(NC组),每组各10只。NC组、A组、B组分别于第3d,C组于第7d取海马,检测海马组织中ALK1和p-Smad1的mRNA及其蛋白的表达。[结果](1)免疫荧光组化结果显示：模型对照组ALK1和p-Smadl蛋白表达量较空白对照组表达增高(P0.05),ALK5 Inhibitor腹腔注射3天组和7天组ALK1和p-Smadl蛋白表达量较模型对照组表达降低(P0.05)。各组的ALK1蛋白AOD值分别为：对照组(0.11±0.05),模型组对照组(0.17±0.04),ALK5 Inhibitor腹腔注射3天组(0.11±0.05),ALK5 Inhibitor腹腔注射7天组(0.08±0.04)；各组的p-Smadl蛋白AOD值分别为：对照组(0.07±0.03),模型组对照组(0.12±0.04), ALK5 Inhibitor腹腔注射3天组(0.09±0.02),ALK5 Inhibitor腹腔注射7天组(0.08±0.02)。各模型组ALK1和p-Smadl蛋白表达量与对照组比较差异具有显著性(P0.05),模型组对照组与ALK5 Inhibitor腹腔注射3天组比较差异具有显著性(P0.05),模型组对照组与ALK5 Inhibitor腹腔注射7天组比较差异具有显著性(P＜0.05), ALK5Inhibitor腹腔注射3天组与ALK5 Inhibitor腹腔注射7天组比较无显著性差异(P0.05)。(2)荧光PCR结果显示：模型对照组ALK1和p-Smad1基因表达量较对照组表达增高(P0.05),ALK5 Inhibitor腹腔注射3天组和7天组ALK1和p-Smad1基因表达量较模型对照组表达降低(P0.05)。各组的ALK1基因相对表达倍数分别为：对照组(1.00±0.00),模型组对照组(3.34±1.52),ALK5Inhibitor腹腔注射3天组(0.94±0.81),ALK5 Inhibitor腹腔注射7天组(0.92±0.42)；各组的p-Smad1基因相对表达倍数分别为：对照组(1.00±0.00),模型组对照组(1.93±0.72),ALK5 Inhibitor腹腔注射3天组(0.98±0.13), ALK5 Inhibitor腹腔注射7天组(0.95±0.06)。各组模型组与对照组比较差异具有显著性(P0.05),模型组对照组与ALK5 Inhibitor腹腔注射3天组比较差异具有显著性(P0.05),模型组对照组与ALK5 Inhibitor腹腔注射7天组比较差异具有显著性(P0.05),ALK5 Inhibitor腹腔注射3天组与ALK5 Inhibitor腹腔注射7天组比较无显著性差异(P0.05)。[结论](1)ALK5抑制剂腹腔注射后导致KA诱导的SD癫痫大鼠ALK1受体和p-Smad1表达下调。(2) TGF-β1—ALK5-p-Smad2/3对TGF-β1—ALK1-p-Smad1/5具有促进作用。
【关键词】：癫痫 TGF-β1 ALK1 P-Smad1 ALK5抑制剂
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.1
【目录】：

• 个人简历3-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分：红藻氨酸癫痫模型的建立及腹腔注射ALK5抑制剂14-17
• 1. 实验材料14-15
• 1.1 实验动物14
• 1.2 主要的实验设备14
• 1.3 主要试剂14
• 1.4 溶液的配制14-15
• 2. 实验方法15-17
• 2.1 KA模型建立及给药15-16
• 2.2 ALK5抑制剂给药方法16-17
• 第二部分：ALK1、p-Smad1蛋白的检测17-23
• 1. 实验目的17
• 2 实验材料17-18
• 2.1 主要的实验设备17
• 2.2 主要试剂17
• 2.3 实验动物及分组17-18
• 3.实验方法18-20
• 3.1 心脏灌注取大鼠取脑组织18
• 3.2 大鼠脑组织石蜡块制作及切片18-19
• 3.3 免疫荧光组织化学技术19-20
• 4. 统计学分析20
• 5. 实验结果20-23
• 5.1 动物行为学观察20
• 5.2 免疫荧光组化结果20-23
• 第三部分：ALK1、p-Smad1基因的检测23-30
• 1. 实验目的23
• 2. 实验方法23-24
• 2.1 主要的实验设备23
• 2.2 主要试剂23-24
• 2.3 动物及分组24
• 3.实验方法24-28
• 3.1 直接断头取大鼠取脑组织24
• 3.2 荧光定量PCR技术24-28
• 3.2.1 海马组织总RNA提取24-25
• 3.2.2 海马组织总RNA纯度测定25-26
• 3.2.3 海马组织cDNA的合成26
• 3.2.4 引物合成与设计26-27
• 3.2.5 RT-PCR反应27-28
• 4. 统计学分析28
• 5. 实验结果28-30
• 讨论30-32
• 结论32-33
• 参考文献33-36
• 中英文对照缩写36-38
• 综述38-51
• 参考文献45-51
• 致谢51-52
• 功读学位期间发表的学术论文52-53
• 附件53-57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：918456