再生丝素蛋白材料血管细胞共培养的研究

发布时间：2017-10-16 00:08

  本文关键词：再生丝素蛋白材料血管细胞共培养的研究

  更多相关文章： 丝素蛋白 管状支架 血管细胞 细胞因子

【摘要】：多数心脑血管疾病例如血栓、动脉硬化、血管老化等需要进行血管替换,临床上已有人体血管替代品,但是主要是大口径血管替代。小口径血管(内径6mm)还没有理想的替代品应用于临床。前期我们已经利用具有良好生物相容性的丝素蛋白和具有良好力学性能的丝素纤维为原料,制备具有内、中、外膜三层结构的小口径仿生管状支架,同时通过改变制备条件(冷冻温度、丝素溶液浓度、交联比例)对管状支架结构和力学性能进行了优化。为了深入解析丝素蛋白管状支架在替代缺损血管后组织重建及其机制,我们进行了再生丝素蛋白材料上血管细胞体外共培养的研究。本文中我们采用两种再生丝素蛋白材料,即再生丝素蛋白膜和再生丝素蛋白管状支架作为研究对象,研究其作为血管细胞(人脐静脉内皮细胞,ECs；人主动脉平滑肌细胞,SMCs;人主动脉成纤维细胞,HAFs)共培养载体时,材料以及细胞间作用对细胞形态、细胞增殖以及细胞功能因子表达的影响。首先进行了再生丝素蛋白膜上血管细胞共培养的研究,采用倒置荧光显微镜观察和DNA含量分析法分别研究了细胞形态和细胞增殖,结果表明：丝素蛋白膜上血管细胞保持正常的形态,培养期间单独培养的血管细胞数量持续增加,同时共培养的血管细胞总数量也持续增加,且组间无显著性差异。免疫荧光分析表明：共培养条件下,EC和SMC可以共同生长,EC在细胞数量上占优势；同样的,共培养条件下,HAF和SMC可以共同生长,HAF在细胞数量上占优势；丝素蛋白膜对SMC表达α-SMA的表达有一定的抑制作用；与EC共培养可以促进SMC表达α-SMA:丝素蛋白膜对EC表达CD31的表达有一定的抑制作用。实时荧光定量PCR研究对丝素材料以及细胞间作用对细胞功能因子表达的影响,结果表明：丝素蛋白膜对血管平滑肌细胞功能因子α-SMA和SM-MHC的表达有一定的抑制作用,但与血管内皮细胞共培养能时却能促进血管平滑肌细胞α-SMA和SM-MHC的表达；丝素蛋白膜及与血管平滑肌细胞共培养对血管内皮细胞功能因子VEGF和CD31的表达均有促进作用；与血管成纤维细胞共培养时也能促进血管平滑肌细胞α-SMA和SM-MHC的表达。作为血管缺损血管替代的丝素蛋白管状支架与丝素蛋白膜具有不同的组织结构,本文进一步开展了丝素蛋白管状支架上血管细胞共培养的研究。研究结果表明：丝素蛋白管状支架可以很好的支持血管内皮细胞和血管平滑肌细胞的粘附、铺展以及增殖；支架上共培养血管内皮细胞和血管平滑肌细胞时,对血管平滑肌细胞的功能因子SM-MHC的表达有显著促进作用,随着培养时间的增加,α-SMA的表达也显著高于单独培养组；血管平滑肌细胞对血管内皮细胞的功能因子VEGF和CD31的表达有促进作用。支架上共培养血管成纤维细胞和血管平滑肌细胞时,对血管平滑肌细胞的功能因子α-SMA和SM-MHC的表达也有促进作用。
【关键词】：丝素蛋白 管状支架 血管细胞 细胞因子
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R318.11
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 引言10-23
• 1.1 人工血管的研究背景10
• 1.2 人工血管的研究进展10-14
• 1.2.1 合成高分子材料人工血管11-12
• 1.2.2 天然材料人工血管12-13
• 1.2.3 复合材料人工血管13-14
• 1.3 丝素蛋白的应用14-17
• 1.4 血管细胞17-20
• 1.4.1 血管结构17
• 1.4.2 血管细胞及其相互作用17-18
• 1.4.3 血管细胞因子18-20
• 1.5 细胞共培养20-21
• 1.6 本文研究目的及研究内容21-23
• 第二章 再生丝素蛋白膜血管细胞共培养研究23-51
• 2.1 实验材料与方法23-31
• 2.1.1 实验材料与试剂23-24
• 2.1.2 实验仪器24
• 2.1.3 实验方法24-31
• 2.2 结果与讨论31-49
• 2.2.1 血管平滑肌细胞与血管内皮细胞共培养细胞形态与增殖31-33
• 2.2.2 血管平滑肌细胞与血管成纤维细胞共培养细胞形态及增殖33-36
• 2.2.3 细胞共培养免疫荧光分析36-40
• 2.2.4 细胞共培养实时荧光定量PCR分析40-49
• 2.3 本章小结49-51
• 第三章 丝素蛋白管状支架血管细胞共培养研究51-60
• 3.1 实验材料与方法51-54
• 3.1.1 实验材料51
• 3.1.2 实验仪器51-52
• 3.1.3 实验方法52-54
• 3.2 结果与讨论54-59
• 3.2.1 丝素蛋白支架上共培养细胞形态54
• 3.2.2 细胞共培养实时荧光定量PCR分析54-59
• 3.3 本章小结59-60
• 第四章 结语60-62
• 4.1 全文结论60-61
• 4.1.1 再生丝素蛋白膜上血管细胞共培养研究60-61
• 4.1.2 再生丝素蛋白管状支架上血管细胞共培养研究61
• 4.2 本文的不足之处61
• 4.3 今后的工作61-62
• 参考文献62-69
• 攻读学位期间本人公开发表的论文69-70
• 致谢70

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本文编号：1039482