蛇毒活性蛋白Natrin与双相生物陶瓷BCP协同促进成骨作用的研究

发布时间：2017-11-10 18:23

  本文关键词：蛇毒活性蛋白Natrin与双相生物陶瓷BCP协同促进成骨作用的研究

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【摘要】：目的：通过体内和体外实验研究生物活性因子广西眼镜蛇毒活性蛋白Natrin和具有骨诱导性的双相生物陶瓷（BCP）对大鼠成骨的影响，探讨活性因子与活性陶瓷材料协同促进成骨的作用，为临床修复大面积颅骨缺损提供依据。 方法：（1）考察单独Natrin蛋白对成骨细胞的作用：体外培养3-7天SD乳鼠原代成骨细胞，用不同浓度的蛋白Natrin（0g/ml,2.5g/ml,5g/ml和10g/ml）干预，分别于2,5，8天测定MTT，ALP活性和成骨相关基因（BMP2， RUNX2，ALP，BSP，OCN，COL1A1）表达，并行FDA/PI、鬼笔环肽、一型胶原、ALP和茜素红染色；（2）考察Natrin蛋白及BCP活性陶瓷对成骨细胞作用的体外实验：将原代成骨细胞种植在多孔HA/β-TCP双相生物陶瓷（BCP,质量比6:4，直径12mm，厚度2mm，孔隙率75%）材料上，然后用不同浓度的蛋白Natrin（0g/ml,1.25g/ml,2.5g/ml和5g/ml）干预，分别于2,5,8天检测MTT，ALP活性和成骨相关基因（BMP2，RUNX2，ALP，BSP，OCN，COL1A1）表达，并行FDA/PI、鬼笔环肽染色和扫描电镜；（3）Natrin蛋白及BCP活性陶瓷用于颅骨缺损修复的动物实验：将成年雄性SD大鼠40只（体重300±20g）随机分配成四组（A, B, C, D组，每组10只），建立矢状缝与人字缝十字交叉右上象限5mm直径圆形颅骨缺损模型，A、B组为不加材料的空白组，，C、D组植入双相生物陶瓷（BCP，质量比6:4，直径5mm，厚度2mm,孔隙率75%）材料，抗炎3天后，A、C组注射等量生理盐水，B、D组于颅骨缺损局部注射Natrin蛋白浓度为5g/ml、2.5g/ml的生理盐水0.5ml，于术后1个月、2个月每组分别处死5只大鼠，行大体观察、硬组织切片，锥束CT扫描。 结果：（1）考察单独Natrin蛋白对成骨细胞的作用：在二维培养中，MTT、ALP活性与成骨相关基因表达的检测等结果表明单独Natrin对成骨细胞的增殖和分化具有促进作用，其最适作用浓度为5g/ml；（2）考察Natrin蛋白及BCP活性陶瓷对成骨细胞作用的体外实验：在三维培养中，MTT、扫描电镜、ALP活性与成骨相关基因表达的检测等结果表明Natrin和BCP陶瓷对成骨细胞的增殖和分化具有协同促进作用，尤其是在Natrin蛋白为2.5g/ml时作用最为明显；（3）Natrin蛋白及BCP活性陶瓷用于颅骨缺损修复的动物实验：大体观察、锥束CT扫描和硬组织切片等检测看出BCP有良好的生物相容性，可促进颅骨缺损修复，添加蛋白Natrin后促进效果更为明显。 结论：Natrin蛋白及BCP活性陶瓷可协同促进颅骨缺损修复，具有较好的临床开发价值。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R687;R318.08

【参考文献】

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1 蒋兴明;焦杨;宋慧;马兴才;周燕;周元聪;舒雨雁;;广西眼镜蛇毒中Natrin蛋白的分离及纯化[J];广西医科大学学报;2011年05期

本文编号：1167828