骨形成蛋白-7促进多孔钽—软骨细胞分泌功能及基因表达的实验研究

发布时间：2018-04-11 08:33

本文选题：多孔钽 + BMP-7　；参考：《河北联合大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的通过比较不同浓度的BMP-7对多孔钽-软骨细胞复合物分泌功能及相关基因的表达作用，探讨BMP-7与多孔钽-软骨细胞复合培养构建组织工程软骨的可行性，为组织工程软骨修复软骨缺损提供实验依据。方法1软骨细胞的培养及分组：3周龄幼兔，，取膝关节软骨行原代培养，将生长状态良好的第3代细胞以1×106/ml细胞浓度接种于多孔钽金属，分为4组:①对照组（软骨细胞与多孔金属钽共培养）；②50ng/ml组（软骨细胞与多孔金属钽共培养，加入rhBMP-7使其在培养基浓度达到50ng/ml）；③100ng/ml组（软骨细胞与多孔金属钽共培养，加入rhBMP-7使其在培养基浓度达到100ng/ml）；④200ng/ml组（软骨细胞与多孔金属钽共培养，加入rhBMP-7使其在培养基浓度达到200ng/ml）。2软骨细胞鉴定：行II型胶原免疫细胞化学染色、阿利新蓝染色（Alcian Blue），番红-O（Safranin-O）染色。3CCK-8法检测不同浓度的BMP-7对多孔钽-软骨细胞生长及增殖情况。4扫描电镜观察各组软骨细胞在多孔钽生长情况。5二甲基亚甲蓝（DMMB）比色定量法对多孔钽-软骨细胞的糖胺多糖（GAG）进行定量分析。6II型胶原、Sox9转录因子免疫细胞化学染色并对其结果进行统计分析。7Real Time-PCR检测COL-II、AGG和Sox9mRNA的表达。结果1软骨细胞形态特点及鉴定：第3代软骨细胞接种后6~8h完成贴壁，24h后细胞呈短梭形、三角形生长；3d时，细胞数量显著增加。Alcian Blue染色、Safranin-O染色、II型胶原免疫细胞化学染色均呈阳性反应。2CCK-8法检测不同浓度BMP-7对多孔钽-软骨细胞的生长、增殖影响，BMP-7对多孔钽-软骨细胞有促进增殖的效果，其中100ng/ml的BMP-7促增殖效果最好，但当BMP-7浓度达到200ng/ml时，细胞增殖受到轻度抑制。3扫描电镜观察各组软骨细胞生长情况，软骨细胞在多孔钽表面上伸展良好，伪足伸展充分，叠层生长，覆盖于多孔钽表面。4二甲基亚甲蓝（DMMB）比色定量法糖胺多糖（GAG）定量检测：各组细胞在培养5d和14d后，50ng/ml组和100ng/ml组均比对照组分泌GAG多，其中以100ng/ml组分泌量最多，并且随着培养时间的延长各组分泌GAG的量均显著增加。5Col-II和Sox9因子免疫细胞化学染色结果：100ng/ml组Col-II和Sox9因子的IOD值均最大，表明100ng/ml组分泌Col-II的量最多。6Real Time-PCR检测软骨细胞COL-II、AGG和Sox9的mRNA表达：50ng/ml组、100ng/ml组和200ng/ml组之间COL-II、AGG和Sox9mRNA表达量，两两比较均有统计学差异（P0.05）且随着BMP-7浓度的提高功能基因的表达量也相应提高，第14d与第5d相比较，各基因的表达增幅程度均有所下降。结论1BMP-7对多孔钽-软骨细胞有促进增殖的效果，其中100ng/ml的BMP-7促增殖效果最好，当BMP-7浓度达到200ng/ml时，细胞增殖受到轻度抑制。2BMP-7对多孔钽-软骨细胞分泌COL-II、AGG起到了促进作用，其中浓度为100ng/ml的BMP-7促进软骨细胞分泌细胞外基质的作用最强。3BMP-7对多孔钽-软骨细胞COL-II、AGG及Sox9因子mRNA表达上调，并且随着浓度的提高各因子的mRNA相对表达量也相应升高。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：河北联合大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R687.3;R318.08

【参考文献】