人牙骨移植材料对巨噬细胞RAW264.7细胞毒性的实验研究

发布时间：2020-04-22 03:07

【摘要】：目的研究由人新鲜离体牙制备而成的人牙骨移植材料(HTBG)对巨噬细胞增殖分化以及炎症反应的影响,探讨人牙骨移植材料在体外的生物相容性和细胞毒性。方法收集人的新鲜离体牙,经试剂处理制备成人牙骨移植材料,而未经试剂处理得到的是未处理牙齿颗粒,再以临床中经常使用的一种人工骨植入物作为对比,在扫描电镜下观察三种材料的表面形貌;分别将材料与细胞共培养24h后,用Hoechst 33342和罗丹明B进行细胞染色,在单光子共聚焦显微镜下观察细胞形态数量变化,判定材料的细胞毒性;按照ISO 10993-12标准制备各材料的浸提液并进行分组:A组为(空白对照组)、B组为经过试剂处理的牙粉颗粒(人牙骨移植材料组)、C组则选临床常用的骨材料(人工骨植入物组)、D组作为阳性对照组是未经试剂处理的牙齿颗粒(未处理牙粉组);取各组材料浸提液分别培养细胞,采用MTT法检测各组浸提液在1、3、5、7d对细胞增殖分化的影响;通过锥虫蓝染色比较各材料浸提液在1-6d对细胞生长曲线的影响;通过流式细胞术检测4组材料的浸提液对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡的影响;采用Western blot实验方法定性检测在各浸提液培养下的细胞对炎症因子TNF-ɑ和IL-6的蛋白的表达;用ELISA方法定量检测在各组材料浸提液培养下的细胞在1、3、5 d产生的TNF-ɑ和IL-6的具体含量。结果扫描电镜结果发现人牙骨移植材料表面有均匀的多孔形貌,具备有效的蛋白载体和支架的结构而未处理牙粉组胶原纤维结构及脱矿牙本质层全层塌陷,无特定结构;共聚焦结果发现小鼠单核巨噬细胞能够在人牙齿移植材料和人工骨植入物上表现为正常的细胞形态和数量,与空白对照组细胞数量无明显差别(P0.05),而与未处理牙粉组细胞数量差异显著(P0.05);MTT检测细胞活性显示,B、C组的吸光度值(A492nm)均高于D组(未处理牙粉组)(P0.05),而A、B、C组之间无明显差异;锥虫蓝染色示,各时间点A、B、C组细胞数量均显著高于D组(P0.05),A、B、C组间无差异(P0.05);细胞凋亡示A,B和C组的凋亡率低于D组细胞(P0.05),而A、B、C组间亦无差别(P0.05);Western blot结果和ELISA检测结果显示,A、B、C组巨噬细胞释放的TNF-α和IL-6均明显低于D组(未处理牙粉组),差异显著(P0.05),而A、B、C组之间无明显差别。结论由人新鲜离体牙制备而成的人牙骨移植材料对巨噬细胞RAW264.7不会产生细胞毒性。人牙骨移植材料在对细胞毒性反应方面与人工骨移植物相同,在体外具有良好的细胞生物相容性,具有成为潜在的修复种植体周围骨缺损和其他相关骨缺损的骨移植材料。
【图文】：

图 1 人牙骨移植材料的制备图注：A 为去除牙髓后的备用牙齿；B 为筛选为 1mm 的颗粒的工具；C 为粉碎后的牙齿颗粒；D 为进行试剂处理的牙齿颗粒。（三）扫描电镜观察材料形貌

扫描电镜下各组材料的表面形态(×5K)
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R783.1

【参考文献】

相关期刊论文 前5条

1 李佩祺;吴补领;高杰;方一如;松本尚之;桥本典也;廖文;;α-磷酸三钙/胶原复合体与自体骨骨修复能力比较[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2015年04期

2 于婷;曲守方;黄杰;孙楠;黄清泉;;医疗器械体外细胞毒性试验相关标准的比较及有关内容的商榷[J];国际检验医学杂志;2015年06期

3 鲜爱明;张晓岗;曹力;徐恩洁;彭理斌;胡洋;;钛基表面纳米银复合涂层体外抗菌活性及生物安全性评价[J];中国组织工程研究;2014年52期

4 张建政,李亚非,骆洪涛,孙天胜,时述山,胥少汀;脱细胞保鲜异种骨移植免疫反应的实验研究[J];山西医科大学学报;2004年06期

5 石应康,程述森,魏蜀亮,华西医科大学附属第一医院胸心外科;不同交联改性牛心包材料的细胞毒性研究[J];华西医科大学学报;1996年02期

相关硕士学位论文 前1条

1 国丽荣;OSTEON修复犬下颌骨缺损的实验研究[D];中国医科大学;2010年

，

本文编号：2636065