聚已内酯材料表面的肝素化修饰及五种肝素修饰酶的表达

发布时间：2020-07-05 03:45

【摘要】：聚己内酯(PCL)是一种生物高分子材料,被广泛地应用于各种生物医学领域。为了增强聚己内酯的生物相容性,需要在聚己内酯材料表面进行肝素化修饰,使肝素以共价键的形式稳定地结合在聚己内酯表面。通过终点固定的方法,利用醛基和氨基发生席夫碱反应,把肝素固定在聚己内酯材料表面。用甲苯胺蓝染色法测得肝素固定化效率为6μg/cm~2。用X射线光电子能谱(XPS)和傅里叶红外光谱进一步检测分析材料结构。XPS分析发现肝素化聚己内酯材料表面增加了氮、硫、钠等元素信号;傅里叶红外光谱分析表明该材料增加了C-N和N-H振动峰。这些实验证明肝素已经与聚己内酯形成了共价结合。为了研究固定化肝素的结构和功能,本文还构建了gor trxB缺陷型大肠杆菌,用该菌株表达了五种肝素修饰酶。谷胱甘肽还原酶(Gor)和硫氧还蛋白还原酶(TrxB)是氧化还原体系中重要的两种酶,敲除trxB基因和gor基因能阻断大肠杆菌细胞内的氧化还原途径,增强二硫键的形成,保证外源蛋白的正常折叠。本文通过λ-red重组系统敲除大肠杆菌中的gor和trxB基因,构建了gor trxB缺陷型菌株;利用gor trxB缺陷菌株表达纯化出四种硫酸转移酶和C5差向异构酶。这四种硫酸转移酶和C5差向异构酶可用于后续探索肝素化聚己内酯材料的结构和生物学活性。终点固定法能够把肝素分子有效地固定在聚己内酯材料表面,为进一步研究该材料的功能和应用奠定了基础。
【学位授予单位】：合肥工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R318.08
【图文】：

单体结构,绪论

第一章绪论第一章绪论酯酯（polycaprolactone，PCL），是一种半结晶型脂肪族聚酯材于化工、材料、医学等领域[1]。其外观为白色固体颗粒，可溶、二氯甲烷、苯、甲苯、环己酮等有机溶剂，不溶于水[2]。PC图 1.1 所示[3]。PCL 的玻璃化温度为-60℃，熔点 59℃到 64℃ 350℃。PCL 具有良好的热塑性，可以加工成各种形状和尺寸良好的生物相容性和生物可降解性，因此被广泛的应用于各种给药系统，组织工程和纳米医学[4-10]。

现性和可控制性。Massella 等用瞬时纳米沉淀法，用于经皮给药，构建的 PCL 纳米粒子能精确，包埋过程非常高效[5]。泛使用的抗凝血药物，首先从肝脏发现而得名和肝、肺、小肠等组织中[20, 21]。目前市面上的中提取，提取纯化得到的肝素平均分子量在 1胺聚糖，由艾杜糖醛酸和葡萄糖胺以 1-4 糖苷键，具有多种生物学功能。肝素结构如图 1.2 所位，分子量 4000-20000，平均分子量为 12000硫酸-N-硫酸-A-D 葡萄糖胺是其中的主要单糖糖醛酸，B-D 葡萄糖醛酸，6-O-硫酸葡萄糖胺等

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