抗坏血酸碳点对骨髓基质细胞内线粒体影响的体外研究

发布时间：2020-07-13 08:57

【摘要】：目的:口腔颌面部骨组织的缺损一直是临床常见的疾病之一,在纳米材料促成骨的系列研究过程中,已经证明抗坏血酸碳点具有促成骨功能,但是这种新型的碳点纳米材料是否与其他纳米材料一样对细胞具有毒性作用并不清楚。本研究从亚细胞角度分析,探索抗坏血酸碳点对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)内线粒体的影响,从而为抗坏血酸碳点在成牙槽骨方面的研究及应用提供依据。方法:1、从维斯塔大鼠股骨内提取骨髓基质细胞并进行体外培养,取第3到5代细胞与抗坏血酸碳点共培养0h、24h、48h、72h后进行实验。2、选取最佳实验浓度:四唑盐比色法(MTT)检测不同浓度抗坏血酸碳点对骨髓基质细胞增殖能力的影响,并选取最佳实验浓度;3、检测细胞内ROS的含量:CM-H2DCFDA染色检测细胞内ROS的量;4、检测对线粒体形态的影响:透射电镜观察线粒体形态;5、检测对线粒体结构的影响:JC-1染色后镜下观察线粒体结构;6、检测对线粒体功能的影响:Western Blot检测AMPKα的表达,ATP检测试剂盒检测ATP产量。结果:1、随着抗坏血酸碳点浓度的增高,骨髓基质细胞的增殖能力下降;并选取最佳实验浓度40μg/m L;2、随着共培养时间的延长,细胞内ROS含量上升;3、随着共培养时间的延长,线粒体的形态逐渐发生裂变、固缩、空泡样改变;4、随着共培养时间的延长,线粒体膜电势降低;5、随着共培养时间的延长,AMPKα表达上升,ATP产量下降。结论:低浓度(浓度40μg/mL)的抗坏血酸碳点对骨髓基质细胞的影响较小;高浓度(浓度40μg/m L)的抗坏血酸碳点随着浓度的升高及共培养时间的延长,抗坏血酸碳点可以引起骨髓基质细胞内ROS产量增多,线粒体的形态改变、结构丧失、功能减退。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R318.08;R782
【图文】：

随着与骨髓基质细胞共培养的抗骨髓基质细胞的增值率逐渐降低。低浓度（≤对骨髓基质细胞的增值率影响不大；随着抗度达到 50μg/mL 时，骨髓基质细胞的增值0μg/mL）相比细胞增值率显著降低，差异具），故选择 40μg/ml 的抗坏血酸碳点进行后

流式细胞术检测细胞内ROS的含量

c.抗坏血酸碳点处理细胞 48h 组 d.抗坏血酸碳点处理细胞图 2.3 透射电镜下观察线粒体的形态2.3.4 荧光探针 JC-1 染色检测线粒体的结构

【参考文献】

相关期刊论文 前3条

1 褚薇薇;聂蕾;和新盈;闫爱丽;周伊;吴庚利;王殿华;;细胞色素c在后处理抗大鼠肠缺血-再灌注损伤细胞凋亡中的变化[J];生理学报;2010年02期

2 姚英民;欧巧群;陈瑶;;人类轮状病毒感染新生小鼠肠道外组织超微结构的变化[J];南方医科大学学报;2006年09期

3 宋东林,吕强,陈晋文,石进,张宏,乔忠森;线粒体肌病和线粒体脑肌病组织化学及电镜的研究[J];中国神经精神疾病杂志;1994年01期

本文编号：2753237