基于胶体金和核酸适配体的检测技术及其初步应用

发布时间：2020-10-11 01:45

　　 胶体金微粒是直径为1~100nm的纳米级材料,属于超细胶体金。胶体金微粒既有金属的化学性质,又具有独特的物理性质,同时还具有表面效应等方面的特点。胶体金颗粒的形貌、大小及聚集状态和其独特的光学效应有很大关联。核酸探针由于具有一系列优点,比如:在合成上非常简单,设计上也比较容易,并且在检测时具有较好的灵敏度和特异性等,因此在核酸检测中被用作一种重要的检测工具。正是由于上述优势,不断的有科研工作者对此进行深入研究,设计了很多具有不同功能的新型检测核酸探针,在很多方面都具有很重要的作用,比如:分子医学、疾病攻克等方面都有重大贡献。核酸适配体(Aptamer)是一段核酸序列,通常是利用体外筛选技术(SELEX)从核酸分子文库中得到的一段寡核苷酸片段。核酸适配体在不同领域都有广泛的用途,比如:生物制药、生物传感、纳米技术等。本论文以此构建了基于核酸适配体、核酸探针以及交联金技术的新型检测方法,可以高灵敏度的检测小分子、离子及蛋白质。针对这些,主要从两个方面开展了工作:1、基于交联金和核酸适配体技术,构建了一种通用胶体金检测多种靶物质的体系。在该体系中,我们发展了高灵敏度检测ATP小分子、钾离子和凝血酶的方法,基于交联胶体金颗粒的原理,通过这种胶体金技术我们可以只用一种紫外分光光度计便可简单地高灵敏地检测到靶物质,甚至直接用肉眼观察颜色判断靶物质的存在与否。与其他比色检测方法相比,该方法的优势在于只用到了一种功能化胶体金颗粒,检测到凝血酶最低下限为5fM,钾离子的最低下限为50nM,ATP分子的最低下限为0.2nM。该方法方便简单,不需酶的存在,无需复杂的仪器设备,费用低,具有较好潜在应用价值。2、基于聚合酶置换靶物质的原理,构建了一种超灵敏通用胶体金检测蛋白质的体系。在该体系中,通过设计核酸适配体,在利用交联金和核酸适配体的基础上,进一步加入了聚合酶聚合置换靶物质循环扩增反应。当没有靶物质存在时,胶体金、核酸适配体与核酸探针互补杂交,使得胶体金不发生团聚现象,胶体金的峰值不会发生偏移。当靶物质存在时,在聚合酶的作用下,核酸适配体可以与靶物质特异性结合进行循环扩增反应,使靶物质能达到0.5aM的检测下限。
【学位单位】：湖南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R318;O648
【部分图文】：

图 1.1 Taqman 探针的工作原理[106]探针又被称作双杂交探针即 FRET 探针，是由两条与模板成[114]。在两条探针中，一条 3’ 端有报告荧光基团，

硕士学位论文时，就会激发产生荧光信号，信号探针游离出来，荧光基团间的距离an 探针比较，由于 Taqman 探针因为能对荧光信号进行一个实时监测，个过程中，监测到的信号强度和模的信号也很很强，当模板的数量很督不到信号的发生。所以 FRET 探NP 基因分型分析[115]，而 Taqman 探 探针的特点，定量检测分析活细胞内胞内，计算荧光强度的比值，得到ET 探针易产生二聚体且背景信号较

图 1.3 核酶切割催化信号放大技术检测 miRNA[126]核酶原有结构进行修饰，使其变为稳定的发夹结构 Zn2+辅酶帮助下，最终对链霉亲和素和 DNA 实现
【参考文献】

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本文编号：2835862