常用牙科合金对p62和Beclin1等自噬相关蛋白的影响

发布时间：2020-10-31 15:36

　　 目的:本课题旨在揭示在常用牙科合金的影响下,口腔黏膜组织、血清及肝、肾组织中不同时间点自噬信号分子的表达情况,进一步明确牙科合金对生物体的影响及其机制,为临床上选择不同生物相容性的牙科合金提供实验基础。方法:本课题根据ISO 10993和YY/T 0127.13-2009标准构建金黄地鼠动物研究模型,分别采用镍铬(Nickel-chromium,Ni-Cr),钴铬(Cobalt-chromium,Co-Cr),钛金属(Commercially pure titanium,CP-Ti),钯基(Palladiumbased,Pd-based)和金铂(Gold-platinum,Au-Pt)合金等常用牙科合金持续刺激金黄地鼠口腔黏膜12周及24周,并用聚丙烯材料作为阴性对照,应用免疫组织化学法(IHC)检测与试件接触的口腔黏膜组织中自噬相关蛋白p62和Beclin1的表达情况;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中自噬相关蛋白p62和Beclin1的表达情况;采用免疫组织化学法和Western blot法检测肝、肾组织中自噬相关蛋白p62和Beclin1的表达情况。结果:1.口腔黏膜组织免疫组化结果表明,五种牙科合金组口腔黏膜组织12周和24周的p62表达强度均不同程度低于阴性组,而Beclin1表达强度则不同程度高于阴性组。其中,12周时五种牙科合金组口腔黏膜组织的p62表达强度与阴性组均无明显差异(P0.05);同期镍铬合金和钴铬合金Beclin1表达强度显著高于阴性组(P0.05),而钛金属、钯基和金铂合金Beclin1表达强度与阴性组无显著性差异(P0.05);在24周时,镍铬和钴铬合金组口腔黏膜组织中p62表达强度较阴性组显著降低(P0.05),Beclin1表达强度较阴性组显著升高(P0.05),而钛金属、钯基和金铂合金组未对口腔黏膜组织中的p62和Beclin1表达强度造成明显影响(P0.05)。2.血清ELISA结果显示,五种牙科合金组血清中12周和24周的p62表达强度均不同程度低于阴性组,而Beclin1表达程度则不同程度高于阴性组。其中,12周时五种牙科合金组血清中的p62和Beclin1表达强度与阴性组均无显著性差异(P0.05);在24周时,镍铬合金组血清中的p62表达强度较阴性组显著降低(P0.05),镍铬合金组和钯基合金组血清中的Beclin1表达强度较阴性组显著升高(P0.05),而钴铬合金组血清中的p62表达强度及钛金属、钴铬和金铂合金组血清中的p62和Beclin1表达强度与阴性组无明显差异(P0.05)。3.肝脏免疫组化和Western blot检测发现,除镍铬合金组外,其余4种牙科合金组肝组织12周和24周的p62表达强度均不同程度低于阴性组,而Beclin1表达程度则不同程度高于阴性组。其中,在12周时钴铬和钯基合金组肝组织中p62和Beclin1表达强度分别较阴性组显著降低和升高(P0.05),而钛金属、镍铬和金铂合金组肝组织中p62和Beclin1表达强度与阴性组无明显差异(P0.05);而在24周时,除了钴铬合金组(P0.05)外,其余4种牙科合金组肝组织中p62和Beclin1表达强度与阴性组无明显差异(P0.05)。4.肾脏免疫组化和Western blot检测显示,除了镍铬和金铂合金组外,其余3种牙科合金组12周和24周肾组织p62表达强度低于阴性组,而Beclin1表达水平则不同程度高于阴性组。其中,只有钴铬合金组在12周和24周时肾组织p62表达明显低于阴性组(P0.05),Beclin1表达强度显着高于阴性组(P0.05),而钛金属、镍铬、钯基和金铂合金组两个时间点的肾组织中p62和Beclin1的表达水平与阴性组没有明显差异(P0.05)5.在口腔黏膜组织、血清和肝肾组织中,p62和Beclin1表达水平均呈负相关(P0.05)。口腔黏膜组织与血清,以及肝组织与肾组织中的自噬变化呈正相关(P0.05);然而,口腔黏膜组织和血清与肝肾组织中的自噬相关蛋白表达均未见显著的相关性(P0.05)。结论:五种常用牙科合金均会引起口腔黏膜组织、血清和肝肾不同程度的自噬水平改变。在口腔黏膜组织和血清中,镍铬和钴铬合金可显著上调其24周细胞自噬水平;此外,钴铬合金还可引起肝肾组织细胞自噬水平明显升高;而钛金属、钯基和金铂合金具有较好的生物相容性。
【学位单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R783.1
【部分图文】：

冷冻高速离心机（Primo R，Heraeus，Germany）；实验室雪花制冰机（IMS-25，江苏常熟市雪科电器有限公司，中国）；组织包埋机（KEDEE，浙江省金华市科迪仪器设备有限公司，中国）；半自动石蜡切片机（FINESSE E+，赛默飞世尔科技公司，中国）；荧光正置相差显微镜（BX53，Olympus，USA）。1.1.3 实验方法1.1.3.1 试件的制备[3,31]1)制作圆片蜡型：制作一个内径尺寸为直径 5.1 mm，厚度 0.7 mm 的金属阴模(图 1-1)，用铸造蜡制得直径 5.1 mm，厚度 0.7 mm 的带柄圆片状蜡型，柄用于连接铸道，并在每个圆片状蜡型直径的三等分处穿出 2 个直径小于 1 mm 的小孔，便于用缝线固定(图 1-2)。

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本文编号：2864141