Bio-oss骨粉对人胎盘源间充质干细胞体外成骨活性影响的研究

发布时间：2020-11-04 06:14

　　 目的与背景:由外伤、肿瘤、拔牙后牙槽骨吸收等原因导致的牙槽骨缺损将直接影响患者心身健康,也成为口腔各专科医生急需解决的问题。近几年出现的骨组织工程技术有可能解决这一难题,那么如何研制出可血管化、成骨效率高、对机体毒副作用小的组织工程骨自然成了目前研究的热点及焦点。本实验采用人胎盘源间充质干细胞(HPMSCs)作为种子细胞,Bio-oss骨粉作为支架材料共同培养欲构建组织工程骨。近年对骨组织工程种子细胞的研究多集中在骨髓间充质干细胞,国内外对人胎盘源间充质干细胞的研究较少。它是通过体外对胎盘的分离提取出的具有干细胞特点的一类间充质细胞,具有供应充足,取材方便,不受伦理学约束的优点。Bio-oss小牛无机骨粉颗粒是一种已经应用于临床治疗的生物材料,经过众多学者研究证明它具有较好的孔隙率及生物相容性。因此,本实验将人胎盘源间充质干细胞与Bio-oss结合,观察人胎盘源间充质干细胞(HPMSCs)与Bio-oss骨粉结合后的增殖分化情况,探讨以人胎盘源干细胞(HPMSCs)作为种子细胞,Bio-oss骨粉作为支架材料联合构建组织工程化生物衍生骨的可能性。实验方法:无菌条件下采用原代细胞分离培养技术获得人胎盘源间充质干细胞,在CO2常温孵育箱中进行常规细胞培养。分别采用以下方法进行检测:(1)第三代细胞采用MTT方法连续8天进行细胞增殖检测,观察细胞形态及生长特点。(2)在成骨诱导液培养下进行成骨细胞诱导,21天后进行茜素红染色观察,并将细胞分为成骨诱导实验组和基础培养对照组组,在诱导第3天、7天、14天三个时间点对两组细胞进行碱性磷酸酶(ALP)检测,比较实验组和对照组的成骨分化情况。(3)成脂诱导液下进行成脂肪细胞诱导,21天后红油O染色观察。(4)将第三代细胞分为实验组与对照组,实验组细胞与Biooss骨粉复合培养,对照组细胞单独培养,在培养第2、4、6、8天采用MTT方法检测两组细胞增殖情况,采用BCA方法检测蛋白含量,ALP检测细胞碱性磷酸酶含量。结果:1.连续8天MTT结果显示:随着细胞培养时间的增加,OD值逐渐变大,表明细胞逐渐增多。2.成骨诱导后可见红色钙结节,且ALP检测结果显示诱导组细胞碱性磷酸酶含量高于非诱导组。成脂诱导后可见明显脂滴。3.MTT、ALP及BCA结果显示:细胞与骨粉结合后实验组与对照组检测值无统计学差异。结论:人胎盘源间充质干细胞与Bio-oss骨粉结合后细胞增殖分化等生物特性与单独细胞培养组无显著性差异。因此,以人胎盘源间充质干细胞作为种子细胞与Bio-oss骨粉结合构成组织工程骨是可行的。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2016
【中图分类】：R783.1
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
中英文词对照表
第1章 引言
第2章 实验研究
    2.1 实验材料
        2.1.1 设备与仪器
        2.1.2 试剂与材料
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 MTT法绘制细胞生长曲线
        2.2.3 细胞诱导分化
        2.2.4 人胎盘源间充质干细胞（HPMSCs）与Bio-oss骨粉复合培养
        2.2.5 MTT法检测复合培养后两组细胞增殖情况
        2.2.6 BCA法检测复合培养后两组细胞内蛋白含量
        2.2.7 ALP法检测复合培养后两组细胞碱性磷酸酶含量
        2.2.8 统计学分析
第3章 实验结果
    3.1 HPMSCs形态学观察
    3.2 细胞生长曲线
    3.3 成骨诱导后定性定量分析
        3.3.1 诱导后茜素红染色
        3.3.2 诱导后细胞内ALP定量检测
    3.4 成脂诱导后红油O染色
    3.5 Bio-oss骨粉与HPMSCs复合培养后两组细胞比较
        3.5.1 Bio-oss骨粉与HPMSCs复合培养后细胞的增殖情况检测
        3.5.2 Bio-oss骨粉与HPMSCs复合培养后细胞内总蛋白含量检测
        3.5.3 Bio-oss骨粉与HPMSCs复合培养后细胞内ALP含量检测
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢

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本文编号：2869741