犬股动脉置换壳聚糖-硫酸化丝素蛋白人工血管:内皮层及血管层的生成

发布时间：2020-11-08 22:16

　　 背景:前期实验制备了壳聚糖-硫酸化丝素蛋白人工血管。目的:通过犬股动脉置换壳聚糖-硫酸化丝素蛋白人工血管,探讨组织工程血管的功效性能。方法:将8只比格犬随机分为2组,实验组于股动脉进行壳聚糖-硫酸化丝素蛋白人工血管置换;正常对照组不进行任何处理。置换后6个月,检测凝血四项后,采用苏木精-伊红染色观察血管结构,免疫组织化学观察血管结构形成,电镜观察血管内皮层及血管层生成情况。结果与结论:1苏木精-伊红染色:实验组血管形成了内皮细胞层、平滑肌层和成纤维细胞层3层主要血管组织,在组织形态上与正常对照组血管无显著差别;2免疫组织化学染色:实验组FactorⅧ染色可见组织边缘一深色带染色即为内皮层形成;á-SMA染色可见较多棕色颗粒沉淀,为血管平滑肌形成;Vimentin染色亦可见较多棕色颗粒沉淀,提示人工血管也形成了成纤维细胞层。该3层组织与正常对照组血管无明显差异;3电镜观察:实验组人工血管内表面及切面与正常对照组血管相似,切面也形成了3层组织,但排列不及正常血管整齐;4凝血四项:两组凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、纤维蛋白原无差异;5结果表明:壳聚糖-硫酸化丝素蛋白人工血管具有较好的生物相容性及功效性能。
【部分图文】：

0)孵育6h，PBS洗3次。常规染色，经脱水、透明后石蜡包埋制片，在显微镜下分别观察所取组织的内皮细胞层、平滑肌层和成纤维图1实验组和正常对照组股动脉血管切面苏木精-伊红染色(×200)Figure1Hematoxylin-eosinstainingresultsofthefemoralarterysectionintheexperimentalandcontrolgroups(×200)图注：图中A为正常对照组，B为实验组。血管形成了内皮细胞层、平滑肌层和成纤维细胞层3层主要血管组织，在组织形态上与对照组正常对照组组血管无明显差别。AB正常对照组实验组FactorⅧ染色á-SMA染色Vimentin染色图2实验组和正常对照组股动脉血管切面免疫组织化学染色结果(×200)Figure2Immunohistochemicalstainingresultsofthefemoralarterysectionintheexperimentalandcontrolgroups(x200)图注：实验组FactorⅧ染色可见组织边缘一深色带染色即为内皮层形成；á-SMA染色可见较多棕色颗粒沉淀，提示血管平滑肌形成；Vimentin染色亦可见较多棕色颗粒沉淀，提示人工血管也形成了成纤维细胞层，该3层组织与正常对照组血管无明显差异。正常对照组实验组血管内表面血管切面图3实验组和正常对照组股动脉内表面和横切面扫描电镜拍照结果(×200)Figure3Electronmicroscopeobservationofthefemoralarteryinnersurfaceandcross-sectionintheexperimentalandcontrolgroups(×200)

血管连同吻合两端血管的一小段剪下，分别放入含有2.5%戊二醛和40g/L多聚甲醛的混合固定液中，4℃固定4h左右。经脱水、透明后石蜡包埋后制片，常规苏木精-伊红染色，在显微镜下观察所取组织形态。血管免疫组织化学染色：置换后6个月，取两组股动脉血管组织切片，PBS漂洗3次，血管内皮第八因子(FactorⅧ）、á-肌动蛋白(á-SMA）和波形蛋白(Vimentin）一抗(1∶200)孵育过夜，PBS洗3次；二抗(1∶400)孵育6h，PBS洗3次。常规染色，经脱水、透明后石蜡包埋制片，在显微镜下分别观察所取组织的内皮细胞层、平滑肌层和成纤维图1实验组和正常对照组股动脉血管切面苏木精-伊红染色(×200)Figure1Hematoxylin-eosinstainingresultsofthefemoralarterysectionintheexperimentalandcontrolgroups(×200)图注：图中A为正常对照组，B为实验组。血管形成了内皮细胞层、平滑肌层和成纤维细胞层3层主要血管组织，在组织形态上与对照组正常对照组组血管无明显差别。AB正常对照组实验组FactorⅧ染色á-SMA染色Vimentin染色图2实验组和正常对照组股动脉血管切面免疫组织化学染色结果(×200)Figure2Immunohistochemicalstainingresultsofthefemoralarterysectionintheexperimentalandcontrolgroups(x200)图注：实验组FactorⅧ染色可见组织边缘一深色带染色即为内皮层形成；á-SMA染色可见较多棕色颗粒沉淀，提示血管平滑肌形成；Vimentin染色亦可见较多棕色颗粒沉淀，提示人工血管也形成了成纤维细胞层，该3层组织与正常对照组血管无明显差异。正常对照组实验组血管内表面血管切面图3实验组和正常对照组股动脉内表面和横切面扫描电镜拍照结果(×200)Figure3Electronmicroscopeobservationofthefemoralarteryinnersurfaceandcross-sectionin

对照组实验组FactorⅧ染色á-SMA染色Vimentin染色图2实验组和正常对照组股动脉血管切面免疫组织化学染色结果(×200)Figure2Immunohistochemicalstainingresultsofthefemoralarterysectionintheexperimentalandcontrolgroups(x200)图注：实验组FactorⅧ染色可见组织边缘一深色带染色即为内皮层形成；á-SMA染色可见较多棕色颗粒沉淀，提示血管平滑肌形成；Vimentin染色亦可见较多棕色颗粒沉淀，提示人工血管也形成了成纤维细胞层，该3层组织与正常对照组血管无明显差异。正常对照组实验组血管内表面血管切面图3实验组和正常对照组股动脉内表面和横切面扫描电镜拍照结果(×200)Figure3Electronmicroscopeobservationofthefemoralarteryinnersurfaceandcross-sectionintheexperimentalandcontrolgroups(×200)
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本文编号：2875432