慢病毒介导hBMP-2和hVEGF-165双基因转染BMSCs后生物学特性研究

发布时间：2020-11-09 07:03

　　 目的:验证慢病毒介导hBMP-2和hVEGF-165双基因转染(两次转染)BMSCs的可行性和转染后BMSCs更良好的诱导成骨性能。方法:分离提取兔BMSCs,流式细胞仪鉴定;将携带hBMP-2基因的慢病毒转染第三代兔BMSCs,细胞倍增后,一半作为单基因转染组,一半用携带hVEGF-165基因的慢病毒再次转染,荧光显微镜下观察。至此,BMSCs分为4组,A组为未转染组、B组为两次转染荧光蛋白基因的空载组、C组为BMP2单基因转染组、D组为hBMP-2和hVEGF-165双基因转染组;转染后不同时间点Western Blot检测目的蛋白表达及变化,MTT检测各组细胞增殖活性,转染后14d检测各组碱性磷酸酶活性。转染后经成骨诱导培养6周,茜素红染色检测骨结节。结果:1.B、C、D组转后染荧光显微镜下均可见相应的绿色及红色荧光蛋白表达。转染后3d C、D组均有相应目的蛋白高表达,转染后7d、14d、21d,目的蛋白检测无明显变化(p0.05);2.细胞增殖检测可见D组增殖稍快于C组(p0.05),C组又明显快于A、B组(p0.05),A、B组细胞增殖曲线的走行方向基本一致(p0.05);3.A、B组碱性磷酸酶染色仅约5%细胞被深染,C组为80%、D组为90%。C、D组ALP活力明显高于A、B组,D组高于C组约1/5。4.C组茜素红染色出的骨结节数量明显多于A、B组,D组骨结节数量比C组稍多且大。结论:慢病毒介导的hBMP-2和hVEGF-165双基因经两次转染能成功转入兔BMSCs内,并长期稳定表达,该双因子的表达能刺激细胞碱性磷酸酶生成,促进间充质干细胞更好的向成骨细胞分化。
【学位单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R68;R318.08
【部分图文】：

图 1 原代 BMSCs 传代后细胞分布均匀，排列呈漩涡状、鱼群状，细胞呈短梭形、三角形。Figure 1 The cell morphology of the 3 th generation of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (×100)

图 2 首次转染第 7 天，即第二次转染后第 4 天，实验组和空载组细胞在荧光显微镜下均见到绿色和红色荧光表达，荧光下细胞形态未见明显改变，综合转染率可达 95%以上。

图 3 双基因转染组转染后 3 日 western blot 检测目的蛋白。Figure 3 Double-gene transfection group was detected by western b
【参考文献】

相关期刊论文 前3条

1 石正松;李强;蔡伟良;宁寅宽;李诗鹏;;腺病毒介导hBMP-2转染BMSCs复合DBM修复兔缺血性股骨头坏死的实验研究[J];天津医药;2015年10期

2 宁寅宽;李强;蔡伟良;武成聪;陈佳滨;石正松;;Ad-BMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞前后生物学特性的研究[J];中国骨质疏松杂志;2014年12期

3 李耀华;;大块血管化组织工程骨修复的骨缺损[J];中国组织工程研究;2014年07期

本文编号：2876068