人脐带间充质干细胞复合壳聚糖/P（LLA-CL）支架体外构建组织工程软骨
发布时间：2021-02-27 07:30
由于创伤、肿瘤及退行性变等各种原因导致的关节软骨损伤在临床上常见,然而由于软骨细胞属于终末分化细胞,软骨本身缺乏血管营养等原因导致软骨组织很难自身修复,从而容易导致关节功能障碍乃至骨关节炎的发生；目前临床上修复关节软骨损伤常用的方法如关节腔清理术、关节磨削成形术、软骨下骨钻孔术及微骨折术等均存在一定不足,而白体或异体软骨细胞移植也存在来源受限及不同程度免疫排斥等问题；比较而言,软骨组织工程无疑是最有发展前景的前沿技术。本课题通过研究人脐带沃顿胶组织来源间充质干细胞的分离培养及扩增探讨新型组织工程种子细胞来源；并对骨髓及脐带来源干细胞的成软骨定向诱导分化能力进行比较研究,从而优化选择软骨组织工程种子细胞。制备新型壳聚糖/P（LLA-CL）软骨组织工程多孔支架,根据组织工程的基本原理体外构建组织工程软骨,以期为软骨组织工程的深入研究和发展提供一定的理论依据和实验基础。第一章人脐带间充质干细胞的分离、培养及生物学特性研究目的研究人脐带沃顿胶来源间充质干细胞的分离、培养并对其进行鉴定,对其生物学特性进行初步研究,为组织工程种子细胞研究提供实验基础。方法无菌获取胎儿脐带沃顿胶组织,采用混合酶消化...
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词简表
前言
第一章 人脐带间充质干细胞的分离、培养及生物学特性研究
1.1 材料与方法
1.1.1 主要试剂与仪器
1.1.2 方法与步骤
1.2 结果
1.2.1 脐带间充质干细胞的形态特征
1.2.2 细胞周期检测
1.2.3 脐带间充质干细胞的表面抗原
1.2.4 脐带间充质干细胞的生长曲线
1.2.5 脐带干细胞分化潜能检测
1.3 讨论
1.4 结论
第二章 人脐带与骨髓来源间充质干细胞成软骨特性比较
2.1 材料与方法
2.1.1 主要试剂与仪器
2.1.2 实验方法与步骤
2.1.3 统计学处理
2.2 结果
2.2.1 脐带间充质干细胞定向诱导后形态变化
2.2.2 定向诱导成软骨后甲苯胺蓝染色
2.2.3 Ⅱ型胶原蛋白免疫组化染色
2.2.4 RT-PCR检测成软骨特异性基因表达
2.3 讨论
2.4 结论
第三章 壳聚糖/P（LLA-CL）多孔泡沫支架的制备及生物相容性研究
3.1 材料与方法
3.1.1 主要试剂
3.1.2 主要仪器
3.1.3 实验动物
3.1.4 实验方法与步骤
3.1.5 统计学处理
3.2 结果
3.2.1 壳聚糖/P（LLA-CL）多孔泡沫支架材料形态观察
3.2.2 理化性能检测结果
3.2.3 细胞复合支架材料观察
3.2.4 细胞-支架复合培养电镜扫描结果
3.2.5 MTT检测支架对细胞增殖的影响
3.2.6 壳聚糖/P（LLA-CL）多孔泡沫支架细胞黏附率测定
3.2.7 动物植入实验
3.3 讨论
3.4 结论
第四章 HUMSCS复合壳聚糖/P（LLA-CL）多孔支架体外构建组织工程软骨
4.1 材料与方法
4.1.1 主要试剂与仪器
4.1.2 主要仪器
4.1.3 实验方法与步骤
4.1.4 统计学处理
4.2 结果
4.2.1 细胞-材料复合体形态观察
4.2.2 组织化学及免疫组化染色
4.2.3 RT-PCR检测Sox-9、Co12a1及aggrecan mRNA表达
4.2.4 Western-blot检测前CoL2a1及aggrecan蛋白表达
4.3 讨论
4.4 结论
参考文献
综述
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]人脐带Wharton胶中间充质干细胞体外无支架组织工程软骨的构建[J]. 侯克东,袁玫,张莉,郭全义,彭江,眭翔,赵斌,刘舒云,卢世璧. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(37)
[2]人脐带Wharton’s jelly源间充质干细胞培养中碱性成纤维细胞生长因子的作用[J]. 巴云涛,关方霞,胡祥,杨波,杜英,张天祥,田毅,乔晓俊,王成春,谷晨熙,雷宁静,王晓薇. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(19)
[3]细胞因子表达谱在人脐带Wharton胶间质干细胞诱导分化成软骨细胞的变化[J]. 侯克东,郭全义,张莉,袁玫,眭翔,汪爱媛,许文静,刘舒云,卢世璧. 中国矫形外科杂志. 2009(21)
[4]关节软骨组织工程种子细胞的研究进展[J]. 张世浩,朱立新. 中国修复重建外科杂志. 2008(12)
[5]包埋PLGA微球壳聚糖支架的构建及其对蛋白释放的调节[J]. 韩钢,陈海靓,孙晓译,高建青,梁文权. 药学学报. 2006(06)
[6]人脐带间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的评价[J]. 王革生,张庆俊,韩忠朝. 中华神经外科杂志. 2006(01)
[7]Human umbilical cord Wharton’s Jelly-derived mesenchymal stem cells differentiation into nerve-like cells[J]. MA Lian, FENG Xue-yong, CUI Bing-lin, Frieda Law, JIANG Xue-wu,YANG Li-ye, XIE Qing-dong and HUANG Tian-huaDepartment of Pediatrics, Second Affiliated Hospital of Shantou University Medical College , Shantou 515041, China Shantou University Medical College, Shantou 515041,China Department of Neurosurgery, Chaozhou Central Hospital, Chaozhou 521021, China Research Center for Reproductive Medicine of Shantou University Medical College, Shantou 515041, China. Chinese Medical Journal. 2005(23)
[8]组织工程骨的研究成果及存在的问题[J]. 杨志明. 中国修复重建外科杂志. 2005(02)
[9]Structure and function of aggrecan[J]. CHRIS KIANI, LIWEN CHEN, YAO JIONG WU, ALBERT J YEE, BURTON B YANG, Sunnybrook and Women’s College Health Sciences Centre and Department of Laboratory Medicine and Patobiology, 2 Department of Surgeny, Faculty of Medicine, University of Toronto, Canada. Cell Research. 2002(01)
本文编号：3053899
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词简表
前言
第一章 人脐带间充质干细胞的分离、培养及生物学特性研究
1.1 材料与方法
1.1.1 主要试剂与仪器
1.1.2 方法与步骤
1.2 结果
1.2.1 脐带间充质干细胞的形态特征
1.2.2 细胞周期检测
1.2.3 脐带间充质干细胞的表面抗原
1.2.4 脐带间充质干细胞的生长曲线
1.2.5 脐带干细胞分化潜能检测
1.3 讨论
1.4 结论
第二章 人脐带与骨髓来源间充质干细胞成软骨特性比较
2.1 材料与方法
2.1.1 主要试剂与仪器
2.1.2 实验方法与步骤
2.1.3 统计学处理
2.2 结果
2.2.1 脐带间充质干细胞定向诱导后形态变化
2.2.2 定向诱导成软骨后甲苯胺蓝染色
2.2.3 Ⅱ型胶原蛋白免疫组化染色
2.2.4 RT-PCR检测成软骨特异性基因表达
2.3 讨论
2.4 结论
第三章 壳聚糖/P（LLA-CL）多孔泡沫支架的制备及生物相容性研究
3.1 材料与方法
3.1.1 主要试剂
3.1.2 主要仪器
3.1.3 实验动物
3.1.4 实验方法与步骤
3.1.5 统计学处理
3.2 结果
3.2.1 壳聚糖/P（LLA-CL）多孔泡沫支架材料形态观察
3.2.2 理化性能检测结果
3.2.3 细胞复合支架材料观察
3.2.4 细胞-支架复合培养电镜扫描结果
3.2.5 MTT检测支架对细胞增殖的影响
3.2.6 壳聚糖/P（LLA-CL）多孔泡沫支架细胞黏附率测定
3.2.7 动物植入实验
3.3 讨论
3.4 结论
第四章 HUMSCS复合壳聚糖/P（LLA-CL）多孔支架体外构建组织工程软骨
4.1 材料与方法
4.1.1 主要试剂与仪器
4.1.2 主要仪器
4.1.3 实验方法与步骤
4.1.4 统计学处理
4.2 结果
4.2.1 细胞-材料复合体形态观察
4.2.2 组织化学及免疫组化染色
4.2.3 RT-PCR检测Sox-9、Co12a1及aggrecan mRNA表达
4.2.4 Western-blot检测前CoL2a1及aggrecan蛋白表达
4.3 讨论
4.4 结论
参考文献
综述
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]人脐带Wharton胶中间充质干细胞体外无支架组织工程软骨的构建[J]. 侯克东,袁玫,张莉,郭全义,彭江,眭翔,赵斌,刘舒云,卢世璧. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(37)
[2]人脐带Wharton’s jelly源间充质干细胞培养中碱性成纤维细胞生长因子的作用[J]. 巴云涛,关方霞,胡祥,杨波,杜英,张天祥,田毅,乔晓俊,王成春,谷晨熙,雷宁静,王晓薇. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(19)
[3]细胞因子表达谱在人脐带Wharton胶间质干细胞诱导分化成软骨细胞的变化[J]. 侯克东,郭全义,张莉,袁玫,眭翔,汪爱媛,许文静,刘舒云,卢世璧. 中国矫形外科杂志. 2009(21)
[4]关节软骨组织工程种子细胞的研究进展[J]. 张世浩,朱立新. 中国修复重建外科杂志. 2008(12)
[5]包埋PLGA微球壳聚糖支架的构建及其对蛋白释放的调节[J]. 韩钢,陈海靓,孙晓译,高建青,梁文权. 药学学报. 2006(06)
[6]人脐带间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的评价[J]. 王革生,张庆俊,韩忠朝. 中华神经外科杂志. 2006(01)
[7]Human umbilical cord Wharton’s Jelly-derived mesenchymal stem cells differentiation into nerve-like cells[J]. MA Lian, FENG Xue-yong, CUI Bing-lin, Frieda Law, JIANG Xue-wu,YANG Li-ye, XIE Qing-dong and HUANG Tian-huaDepartment of Pediatrics, Second Affiliated Hospital of Shantou University Medical College , Shantou 515041, China Shantou University Medical College, Shantou 515041,China Department of Neurosurgery, Chaozhou Central Hospital, Chaozhou 521021, China Research Center for Reproductive Medicine of Shantou University Medical College, Shantou 515041, China. Chinese Medical Journal. 2005(23)
[8]组织工程骨的研究成果及存在的问题[J]. 杨志明. 中国修复重建外科杂志. 2005(02)
[9]Structure and function of aggrecan[J]. CHRIS KIANI, LIWEN CHEN, YAO JIONG WU, ALBERT J YEE, BURTON B YANG, Sunnybrook and Women’s College Health Sciences Centre and Department of Laboratory Medicine and Patobiology, 2 Department of Surgeny, Faculty of Medicine, University of Toronto, Canada. Cell Research. 2002(01)
本文编号：3053899
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