基于微片段化脂肪组织的干细胞天然支架对软骨缺损修复的研究

发布时间：2021-03-04 05:04

　　关节软骨是一种覆盖于关节表面、结构特殊的结缔组织,主要由软骨基质和软骨细胞构成,没有血管和神经分布,一旦发生损伤难以自我再生修复。近年来,干细胞治疗在再生医学领域的发展为软骨再生提供了新的希望。脂肪间充质干细胞（ASCs）因具有来源丰富、低侵入性、易于获取和多向分化潜能等优势,广泛应用于再生研究。然而,体外培养扩增过程会引起细胞衰老并降低ASCs的分化潜能,同时传统的酶消化法会破坏ASCs表面结构,影响细胞活性,外源性胶原酶还存在传播疾病的可能。因此,我们通过纯物理的机械方法处理脂肪组织,旨在获得内含丰富高活性ASCs的天然支架,用于体内软骨缺损的修复并评估其再生疗效。Lipogems?是一种新型的、封闭的设备,可以利用磁珠震荡乳化脂肪组织、减小脂肪簇的粒径并除去残留的致炎性油脂和血液,以获得微片段化脂肪组织（MFAT）。通过细胞流式分选技术确定MFAT来源细胞主要为ASCs,并在体外进行三系诱导分化验证其具有多向分化潜能。通过体外的划痕实验和迁移实验研究MFAT对软骨细胞迁移的影响。最后在体内确定MFAT是否可以通过脂肪组织结构的天然支架,ASCs细胞成分和分泌的细胞因子和趋化因子等... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

微片段化脂肪组织处理获取的过程

浙江大学硕士学位论文正文结果173.1微片段化脂肪组织源性间充质干细胞的表征与鉴定微片段化脂肪组织于培养瓶中培养7-21天后，细胞贴壁生长，呈短梭形，同时有部分漂浮物和脂滴存在（图2-A）。待细胞生长融合至80%后传代，传代后细胞呈长梭形，集落状生长，分布均匀，形态一致，增殖迅速，与典型的间充质干细胞形态一致，一般3天可长满（图2-B、C）。图2.微片段化脂肪组织源性间充质干细胞的形态和诱导分化结果。A.原代细胞（40×）；B.第1代细胞（40×）；C.第2代细胞（40×）;D.油红O染色；E.茜素红染色；F.阿利新蓝染色。标尺：200μm。微片段化脂肪组织源性间充质干细胞在成脂诱导分化条件下培养21天后进行油红O染色，显微镜下可观察到明显的脂滴形成，对照组未见明显的脂滴（图3-A）。微片段化脂肪组织源性间充质干细胞在成骨诱导分化条件下培养21天后进行茜素红染色，显微镜下可观察到明显的钙结节形成，对照组未见

浙江大学硕士学位论文正文结果18明显的钙结节（图3-B）。微片段化脂肪组织源性间充质干细胞在成软骨诱导分化条件下培养21天后进行阿利新蓝染色，显微镜下可观察到软骨微球切片组织被染为蓝色，呈阳性反应（图3-C）。细胞表面抗原分析结果表明，微片段化脂肪组织来源的细胞表面表达间充质干细胞标记分子CD29，CD44和CD90，而不表达造血干细胞标记分子CD31，CD34和CD45（图3），符合间充质干细胞（ASCs）的表型特征。图3.微片段化脂肪组织源性间充质干细胞的流式表型鉴定结果。阳性表达CD29，CD44和CD90等间充质干细胞标记分子，阴性表达CD31，CD34和CD45等造血干细胞标记分子。


本文编号：3062612