PAT蛋白抑制饥饿诱导的脂滴快速融合

发布时间：2021-03-04 10:24

　　目的:脂滴快速融合是增大脂滴直径的方式之一,但其研究相对少。本研究旨在建立脂滴快速融合的细胞模型,以便对其进行深入的生物学研究。方法:本研究使用大鼠肾成纤维细胞系NRK和小鼠前脂肪细胞系3T3-L1两种细胞系,先用油酸诱导细胞内产生大量脂滴,再使用饥饿缓冲液培养细胞,利用显微镜实时观测技术跟踪脂滴动态变化,建立脂滴快速融合的模型。而后在此模型中,加入自噬抑制剂或者以过表达CCT为阳性对照,过表达PAT蛋白（PLIN1、ADRP和TIP47）,来探究它们在调控脂滴快速融合方面的功能。结果:饥饿缓冲液处理约3小时可诱导细胞发生脂滴快速融合,其融合速率很快,从脂滴接触到融合完成可发生在20秒内,显然不同于CIDE蛋白调控的缓慢脂滴融合过程。自噬抑制剂可以抑制自噬,但是并没有显著影响脂滴快速融合,说明饥饿诱导的脂滴快速融合不依赖于自噬。另发现,与过表达GFP相比,过表达定位于脂滴的GFP-CCT、GFP-PLIN1、GFP-ADRP或GFP-TIP47均能显著性抑制快速融合导致的脂滴变大的现象。结论:本研究建立了饥饿缓冲液诱导脂滴发生快速融合的细胞模型,并证明PAT蛋白（PLIN1、ADRP、... 

【文章来源】：现代生物医学进展. 2020,20(04)

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

饥饿处理诱导NRK细胞发生脂滴快速融合

在正常生长培养基（DMEM+10%FBS）培养细胞的情况下，3T3-L1细胞中脂滴较小且少，不便于观察脂滴形态。于是本研究在3T3-L1细胞的生长培养基中添加200μM OA，并维持16小时，诱导脂滴的积累。进一步，使用饥饿缓冲液处理细胞，相较于未饥饿处理的细胞，经过饥饿处理后的细胞内的脂滴直径明显增大（图1）。2.2 NRK细胞发生脂滴快速融合现象

进一步，我们检测了过表达PAT脂滴蛋白是否影响细胞自噬水平。与表达GFP细胞相比，表达GFP-CCT、GFP-PLIN1、GFP-ADRP以及GFP-TIP47的NRK细胞，在经历饥饿处理后表现为相对一致的自噬水平：p62蛋白减少；LC3剪切增加（图4A）。表明饥饿诱导了自噬的发生，不同质粒转染的细胞之间自噬水平没有显著性差异。同时，我们也在稳转GFP-LC3的NRK细胞中过表达脂滴定位蛋白CCT和PAT蛋白（PLIN1、ADRP）。同样地发现，由饥饿缓冲液诱导产生的脂滴增大现象被抑制，NRK-GFP-LC3细胞系的结果与前面NRK细胞系的结果一致。


本文编号：3063049