ZHX3基因沉默对BMSCs中BMP2/smad通路的影响

发布时间：2021-05-11 15:34

　　目的:探讨转录抑制因子——锌指蛋白和同源框3（zinc fingers and homeoboxes 3,ZHX3）基因沉默对骨髓间充质干细胞（bone marrow stem cells,BMSCs）中BMP2/smad通路相关因子骨形成蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP2）、磷酸化smad1（phospho-smad1（或pho-smad1））表达的影响。方法:构建ZHX3低表达慢病毒载体转染大鼠BMSCs,同时设阴性对照空载病毒转染BMSCs及空白对照不做任何处理的BMSCs。采用荧光显微镜下测定细胞转染率、免疫印迹技术鉴定转染效果、免疫细胞化学和免疫印迹技术定性定量检测ZHX3沉默时BMP2、pho-smad1和smad4的表达情况。细胞经成骨诱导液处理后进行碱性磷酸酶和茜素红染色检测各组细胞成骨能力。结果:1复苏培养的细胞具有BMSCs形态。2转染后,ZHX3低表达组和空载体对照组均表达绿色荧光,转染率分别为（93.18±4.41）%和（92.56±4.35）%,空白对照组不表达荧光,未见转染阳性细胞（F=1 123.464,P<0... 

【文章来源】：重庆医科大学学报. 2016,41(10)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 实验方法
        1.2.1 SD大鼠BMSCs的复苏培养与传代
        1.2.2 一般状态观察及3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT)检测
        1.2.3 慢病毒转染BMSCs及鉴定
        1.2.4 实验分组
        1.2.5 免疫荧光法检测BMP2、pho-smad1和smad4蛋白表达
        1.2.6免疫印迹法检测BMP2、pho-smad1和smad4蛋白表达
        1.2.7 BMSCs的诱导分化
        1.2.8 茜素红染色
        1.2.9 碱性磷酸酶染色
    1.3 统计学处理
2 结果
    2.1 BMSCs的培养
    2.2 一般状态观察及MTT检测
    2.3 慢病毒转染BMSCs及鉴定
    2.4 免疫荧光检测BMP2、phos-smad1和smad4表达情况
    2.5 免疫印迹检测BMP2、pho-smad1和smad4蛋白表达
    2.6 茜素红染色
    2.7 碱性磷酸酶染色
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]Osteogenic differentiation of amniotic fluid mesenchymal stromal cells and their bone regeneration potential[J]. Caterina Pipino,Assunta Pandolfi.  World Journal of Stem Cells. 2015(04)
[2]ZHX3基因转染BMSCs及对体外成骨能力的实验研究[J]. 李季,秦书俭,包翠芬,桑瑶采,屈惠莹.  中国临床解剖学杂志. 2014(02)
[3]成人骨髓间充质干细胞体外培养、鉴定与成骨诱导[J]. 张铭杰,张庆文,何伟,陈镇秋,欧志学,贾晓军.  中国组织工程研究. 2013(45)



本文编号：3181658