含RGD肽类弹性蛋白制备及促HUVECs细胞黏附的影响

发布时间：2021-06-06 13:30

　　目的探讨含RGD肽的类弹性蛋白多肽RGD-ELPs和RDG-ELPs与细胞相容性及两种融合蛋白对人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）黏附的影响.方法应用大肠杆菌系统表达RGDELPs和RDG-ELPs蛋白,利用可逆相变循环（ITC）纯化两种融合蛋白;通过MTT法及活/死细胞染色法检测两种融合蛋白与人胚肾细胞（HEK293T）的相容性;通过贴壁细胞计数方法检测不同浓度RGD-ELP对体外HUVECs细胞黏附表达的影响.结果利用BL21（DE3）大肠杆菌表达系统制备高浓度的RGD-ELPs和RDGELPs,通过ITC纯化得到了高纯度融合蛋白; MTT法及活/死细胞染色法结果提示RGD-ELPs和RDG-ELPs蛋白具有良好的相容性;细胞黏附实验结果表明:RGD-ELPs浓度越大,HUVEC细胞黏附能力越强,而对照组RDGELPs则未显示出明显的细胞黏附效果.结论成功表达并纯化了RGD-ELPs和RDG-ELPs融合蛋白;两种蛋白均具有良好的细胞相容性; RGD-ELPs蛋白具有明显的促进HUVECs细胞黏附作用. 

【文章来源】：北华大学学报(自然科学版). 2020,21(06)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

RGD-ELPs和RDG-ELPs融合蛋白的原核表达

通过ITC方法纯化RGD-ELPs和RDG-ELPs融合蛋白．在4℃条件下，因融合蛋白低于其相变温度(inverse temperature transition,Tt)，具有较高溶解度，分布于上清液中;当温度升高至37℃时，蛋白由于高于相变温度而发生相转变，以聚集体形式存在，目的蛋白从上清液中析出，通过离心收集沉淀复溶即可得到目的蛋白．纯化结果见图2．在预计分子量大小附近出现比较明显的蛋白条带，尽管在目的蛋白上方有少量杂蛋白条带，但目的蛋白仍然显示出较高的蛋白纯度．2.3 细胞相容性分析

利用MTT法检测不同浓度的RGD-ELPs和RDG-ELPs融合蛋白对HEK293T细胞增殖能力的影响．结果见图3．加入蛋白后培养48 h，不同浓度的RGD-ELPs和RDG-ELPs融合蛋白处理组生长良好，在蛋白浓度为200μg/m L时细胞存活率仍接近100%，说明两种蛋白具有良好的细胞相容性．活/死细胞染色也可用于评估材料与细胞的相容性，结果显示:与不加蛋白溶液的对照组比较，RGD-ELPs和RDG-ELPs处理组绝大多数为明亮的绿色细胞(活细胞)，细胞轮廓边界清晰，尽管视野中有少数红色细胞(死细胞)，推测可能是由于细胞汇合度过高而造成的，进一步提示两种融合蛋白具有良好相容性．2.4 细胞黏附表达结果分析

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3214476