调控微环境改善大鼠骨髓间充质干细胞骨再生效能的实验研究

发布时间：2021-06-07 07:09

　　骨髓间充质干细胞是骨缺损修复的前提条件,如何提高骨髓间充质干细胞在骨缺损区域再生中发挥的作用,是研究缺损修复的核心问题。我们设计实验,利用骨组织工程支架材料搭载小干扰RNA及局部应用神经肽等多种方法调控细胞微环境,进而提高大鼠骨髓间充质干细胞的迁移,分化和增殖能力。实验一壳聚糖搭载两种小干扰RNA对大鼠骨髓间充质干细胞成骨成血管分化的作用目的:将两种分别促进成骨和成血管的si RNA同时搭载到壳聚糖凝胶中,制成新的骨组织工程支架材料,研究此种新型支架材料对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的作用。方法:制备壳聚糖凝胶,用脂质体2000搭载si Ckip-1和si Flt-1、单独搭载si Ckip-1、单独搭载si Flt-1,搭载si NC导入壳聚糖凝胶中,将大鼠骨髓间充质干细胞接种至之前4组搭载si RNA的支架材料及不搭载任何si RNA的壳聚糖凝胶中,观察这五组支架材料对骨髓间充质干细胞增殖和分化的作用。结果:RT-q PCR分析显示si Ckip-1+si Flt-1组中ALP、OCN以及VEGF的表达显著高于其余四组,有统计学差异（P<0.05）,免疫荧光染色的结果显示,s... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

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前言
文献回顾
实验一 壳聚糖搭载两种小干扰RNA对大鼠骨髓间充质干细胞成骨成血管分化的作用
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 实验器材
    2 方法
        2.1 壳聚糖凝胶制备
        2.2 搭载siRNA支架材料制备
        2.3 搭载siRNA的支架材料降解曲线
        2.4 细胞培养鉴定
        2.5 细胞附着和增殖
        2.6 siRNA和细胞的共区域化
        2.7 RT-qPCR分析检测靶基因及成骨成血管基因表达
        2.8 免疫荧光检测成骨成血管相关蛋白表达
        2.9 细胞外基质矿化
        2.10 数据分析
    3 结果
        3.1 搭载siRNA后壳聚糖凝胶的表征
        3.2 细胞表型鉴定结果
        3.3 细胞附着和增殖
        3.4 si RNA 和细胞的共区域化
        3.5 RT-qPCR分析检测结果
        3.6 细胞外基质矿化与免疫荧光分析
    4 讨论
实验二 体内植入搭载两种小干扰RNA的壳聚糖对大鼠颅骨缺损修复的作用
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 实验器材
    2 方法
        2.1 支架材料植入大鼠颅骨缺损区域
        2.2 Micro-CT检测成骨效果
        2.3 Van Gieson染色
        2.4 数据分析
    3 结果
        3.1 颅骨缺损再生效果
    4 讨论
实验三CGRP对大鼠间充质干细胞迁移，增殖和成骨分化的影响
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 实验器材
    2 方法
        2.1 细胞分离培养鉴定
        2.2 CGRP对BMSCs中SDF-1 的分泌和表达的影响
        2.3 Transwell检测CGRP对BMSCs迁移能力的促进作用
        2.4 BrdU检测CGRP对BMSCs增殖能力的促进作用
        2.5 CGRP对BMSCs成骨分化的作用
        2.6 数据分析
    3 结果
        3.1 CGRP对大鼠BMSCs分泌SDF-1 和SDF-1mRNA表达的影响
        3.2 CGRP对大鼠BMSCs迁移能力的影响
        3.3 CGRP对大鼠BMSCs增殖能力的影响
        3.4 CGRP对BMSCs成骨分化的作用
    4 讨论
实验四 局部注射降钙素基因相关肽CGRP对SD大鼠下颌骨单侧牵张成骨效果的影响
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 手术器械
        1.4 主要材料及仪器
    2 方法
        2.1 牵张器植入术
        2.2 动物分组及标本获得
        2.3 Micro-CT分析
        2.4 组织形态学观察及定量分析
        2.5 数据分析
    3 结果
        3.1 大体标本观察
        3.2 Micro-CT分析
        3.3 骨组织学观察
    4 讨论
实验五 局部应用CGRP对下颌骨牵张中间充质干细胞动员的作用
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 手术器械
        1.4 主要材料及仪器
    2 方法
        2.1 手术步骤
        2.2 免疫组织化学检测Nestin表达
        2.3 外周血CD29阳性细胞计数
        2.4 外周血中SDF-1 含量检测
        2.5 qRT-RCR检测牵张区SDF-1mRNA的表达
        2.6 数据分析
    3 结果
        3.1 免疫组织化学法检测Nestin的表达
        3.2 外周血CD29阳性细胞数量
        3.3 外周血中的SDF-1 的表达
        3.4 牵张区骨组织SDF-1mRNA表达
    4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]The role of vascular endothelial growth factor in ossification[J]. Ricky Wong,Alex Wenden,A Bakr M Rabie.  International Journal of Oral Science. 2012(02)
[2]成骨细胞和骨细胞的力学信号转导(英文)[J]. 张舒,曹新生,王冰.  中国组织工程研究与临床康复. 2011(24)



本文编号：3216118