pH响应聚合物的合成及其在外泌体分离中的应用
发布时间：2021-08-16 19:16
外泌体是一类可由绝大多数细胞分泌的微囊泡,携带有大量的核酸、蛋白质等信息。此外,外泌体与多种生理和病理功能相关,因此在疾病诊断和治疗过程中具有重要的应用价值。开发新型的外泌体分离材料对于研究外泌体及其生物医学功能具有重要的意义。本论文通过自由基聚合法合成了具有溶解-沉淀特性的pH响应聚合物材料,并研究了其对外泌体的分离富集性能。全文共分为四章:第一章:分为四小节,第一节是外泌体概述;第二节简述了外泌体分离方法研究近况;第三节简述了pH响应聚合物的研究进展;最后一节简述了本论文的主要研究内容。第二章:通过对氨基偶氮苯和丙烯酰氯反应合成了丙烯酰胺偶氮苯（AAAB）单体,以AAAB和甲基丙烯酸二甲氨基乙酯（DMAEMA）为单体,在偶氮二异丁腈（AIBN）引发下,合成了pH响应聚合物材料。利用傅里叶变换红外光谱仪、质谱仪、核磁共振波谱仪等技术证明了pH响应聚合物已成功制备。紫外浊度测试表明pH响应聚合物具有灵敏的pH响应特性,溶解-沉淀响应的ΔpH在1个pH单位左右,当pH由6.5增加到7.5时沉淀析出率在95%以上,且循环稳定性良好。采用牛血清白蛋白（BSA）溶液考察了pH响应聚合物的非特异...
【文章来源】：河北大学河北省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
外泌体分泌及其结构示意图[6]
河北大学硕士学位论文4图1-2基于差速离心的外泌体纯化流程图Fig1-2FlowchartofexosomepurificationbasedondifferentialcentrifugationKim等人[56]比较了不同UC循环次数对外泌体富集纯度的影响。一维凝胶图像显示，要成功地从分离的外泌体中去除非外泌体蛋白质，至少需要进行5个UC周期，但是外泌体的产量很低，从0.001-0.01%不等。蔗糖密度梯度离心法是另一种利用密度不同分离外泌体的方法[54,57]，外泌体的漂浮密度在1.15-1.19g/mL之间。Gupta等人[58]比较了一步法蔗糖缓冲UC（SUC）与差速UC用于外泌体分离时的差异。在他们的研究中，均以脂肪组织间充质干细胞和骨髓间充质干细胞为模型，并分别用UC和SUC法纯化外泌体。通过SUC法获得的外泌体的浓度增加了约2-3倍。此外，新的等渗梯度（如碘克沙醇梯度）已被用来维持外泌体囊
第二章pH响应聚合物的制备、表征及响应性分析11泌体的破坏。此外，要求pH响应聚合物应具有较高的沉淀析出率，以提高外泌体的捕获率。基于以上原则，本文选择了AAAB和DMAEMA作为单体，采用传统的自由基聚合方法合成了pH响应聚合物。pH响应聚合物的制备过程分为两步，第一步首先合成AAAB，如图2-1所示，准确称取对氨基偶氮苯2g，置于100mL圆底烧瓶中，加入55mL重蒸后的无水二氯甲烷，振荡、搅拌使其完全溶解后加入三乙胺2.1mL。充分搅拌30min后，在冰浴下逐滴加入丙烯酰氯1.2mL，在氮气保护下反应过夜。反应结束后，用5%的碳酸氢钠溶液洗涤反应产物3次，分液漏斗收集有机层，40°C旋转蒸发去除溶剂二氯甲烷得到黄色固体粉末。然后用水和乙醚洗涤产物，过滤，最后将产物放到真空干燥箱中干燥后低温避光保存备用，所得AAAB产率为78.26%。图2-1AAAB的合成Fig.2-1SynthesisofAAAB第二步以AAAB和DMAEMA为单体，通过自由基聚合反应合成pH响应聚合物（图2-2）。为了控制pH响应聚合物的沉淀临界pH值，尝试了三种AAAB/DMAEMA投料摩尔比3:1、1:1、1:3，引发剂AIBN的量均为反应单体总物质的量的1%，粗测产物溶解-沉淀临界pH值，结果归纳如表2-3所示。由表2-3可知，当单体投料比为AAAB:DMAEMA=1:1时，pH响应聚合物的沉淀临界pH可满足后续分析的要求，因此本实验后续试验合成的pH响应聚合物均采用此比例。图2-2pH响应聚合物的合成路线图Fig.2-2ThesyntheticrouteofpHresponsivepolymer
本文编号：3346237
【文章来源】：河北大学河北省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
外泌体分泌及其结构示意图[6]
河北大学硕士学位论文4图1-2基于差速离心的外泌体纯化流程图Fig1-2FlowchartofexosomepurificationbasedondifferentialcentrifugationKim等人[56]比较了不同UC循环次数对外泌体富集纯度的影响。一维凝胶图像显示，要成功地从分离的外泌体中去除非外泌体蛋白质，至少需要进行5个UC周期，但是外泌体的产量很低，从0.001-0.01%不等。蔗糖密度梯度离心法是另一种利用密度不同分离外泌体的方法[54,57]，外泌体的漂浮密度在1.15-1.19g/mL之间。Gupta等人[58]比较了一步法蔗糖缓冲UC（SUC）与差速UC用于外泌体分离时的差异。在他们的研究中，均以脂肪组织间充质干细胞和骨髓间充质干细胞为模型，并分别用UC和SUC法纯化外泌体。通过SUC法获得的外泌体的浓度增加了约2-3倍。此外，新的等渗梯度（如碘克沙醇梯度）已被用来维持外泌体囊
第二章pH响应聚合物的制备、表征及响应性分析11泌体的破坏。此外，要求pH响应聚合物应具有较高的沉淀析出率，以提高外泌体的捕获率。基于以上原则，本文选择了AAAB和DMAEMA作为单体，采用传统的自由基聚合方法合成了pH响应聚合物。pH响应聚合物的制备过程分为两步，第一步首先合成AAAB，如图2-1所示，准确称取对氨基偶氮苯2g，置于100mL圆底烧瓶中，加入55mL重蒸后的无水二氯甲烷，振荡、搅拌使其完全溶解后加入三乙胺2.1mL。充分搅拌30min后，在冰浴下逐滴加入丙烯酰氯1.2mL，在氮气保护下反应过夜。反应结束后，用5%的碳酸氢钠溶液洗涤反应产物3次，分液漏斗收集有机层，40°C旋转蒸发去除溶剂二氯甲烷得到黄色固体粉末。然后用水和乙醚洗涤产物，过滤，最后将产物放到真空干燥箱中干燥后低温避光保存备用，所得AAAB产率为78.26%。图2-1AAAB的合成Fig.2-1SynthesisofAAAB第二步以AAAB和DMAEMA为单体，通过自由基聚合反应合成pH响应聚合物（图2-2）。为了控制pH响应聚合物的沉淀临界pH值，尝试了三种AAAB/DMAEMA投料摩尔比3:1、1:1、1:3，引发剂AIBN的量均为反应单体总物质的量的1%，粗测产物溶解-沉淀临界pH值，结果归纳如表2-3所示。由表2-3可知，当单体投料比为AAAB:DMAEMA=1:1时，pH响应聚合物的沉淀临界pH可满足后续分析的要求，因此本实验后续试验合成的pH响应聚合物均采用此比例。图2-2pH响应聚合物的合成路线图Fig.2-2ThesyntheticrouteofpHresponsivepolymer
本文编号：3346237
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