大鼠腰椎软骨终板干细胞的获取及脱细胞软骨基质组织支架的制备

发布时间：2022-10-18 16:25

　　目的:分离及鉴定大鼠腰椎软骨终板干细胞,并制备脱软骨细胞基质,探究脱软骨细胞基质的生物相容性及对大鼠腰椎软骨终板干细胞的分化影响;将脱细胞软骨基质联合壳聚糖经冷冻干燥法制备组织支架,探究软骨干细胞在支架上的增殖与凋亡。方法:分离大鼠腰椎软骨终板,使用酶联合消化获得原代软骨细胞;将软骨细胞按照一定的密度接种培养后,结晶紫染色,计算软骨干细胞集落形成的百分比;胰酶消化集落并进行扩增培养,加入成骨,成脂肪及成软骨诱导培养液诱导相应的天数后,使用茜素红,油红O及番红染色,观察其多向分化能力;流式细胞仪检测干细胞表面阳性标记物CD44和CD90及阴性标记物CD45的表达情况。将家猪软骨粉碎后,胰酶联合核酶TritonX-100处理得到脱细胞软骨基质,DAPI染色观察软骨组织脱细胞效果;电镜扫描观察脱细胞基质的形态;傅里叶红外光谱仪分析脱细胞基质的组成成分;将脱细胞基质溶于醋酸后,制备成脱细胞基质膜,观察其大体特点;将获得的终板软骨干细胞种植于膜上,倒置相差显微镜下观察软骨干细胞生长形态,并用CCK-8检测软骨干细胞在基质膜上的增殖情况,与空白板进行对照;引入细胞相对增值率（RGR）的概念,建立新... 

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中英文缩略词对照表
摘要
ABSTRACT
前言
研究材料(资料、内容)与方法
    1 实验材料
    2 实验方法
        2.1 大鼠腰椎软骨终板干细胞的获取及鉴定
        2.2 脱细胞软骨基质的制备及物理学特点
        2.3 脱细胞软骨基质的生物相容性
        2.4 脱细胞软骨基质对软骨终板干细胞的分化影响
        2.5 基因表达分析
        2.6 脱细胞软骨基质联合壳聚糖组织工程支架
        2.7 支架的生物学活性
结果
讨论
结论
参考文献
综述 椎间盘退变治疗方法的研究进展
    参考文献
作者简介及读研期间主要科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Runx2、Osterix转录因子过表达驱动内皮细胞成骨分化的机制探讨[J]. 杨光正,张文杰,丁迅,张翔凯,蒋欣泉,张志愿.  上海口腔医学. 2017(04)
[2]Stem cells sources for intervertebral disc regeneration[J]. Gianluca Vadalà,Fabrizio Russo,Luca Ambrosio,Mattia Loppini,Vincenzo Denaro.  World Journal of Stem Cells. 2016(05)
[3]细胞老化及老化表型改变在椎间盘退行性变中的研究进展[J]. 王锋,郑陈静美,吴小涛.  中国修复重建外科杂志. 2012(12)



本文编号：3692659